| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 符号说明 | 第14-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-26页 |
| 1.1 真菌内质网蛋白折叠途径 | 第16-19页 |
| 1.1.1 真菌内质网蛋白折叠途径概述 | 第16-17页 |
| 1.1.2 内质网非折叠蛋白响应(UPR) | 第17-18页 |
| 1.1.3 内质网关联降解途径(ERAD) | 第18-19页 |
| 1.2 丝状真菌里氏木霉 | 第19-21页 |
| 1.2.1 里氏木霉简介 | 第19-20页 |
| 1.2.2 里氏木霉纤维素酶系 | 第20页 |
| 1.2.3 里氏木霉异源蛋白表达 | 第20-21页 |
| 1.3 β-葡萄糖苷酶概述 | 第21-23页 |
| 1.4 漆酶概述 | 第23-24页 |
| 1.5 本论文研究意义及主要内容 | 第24-26页 |
| 1.5.1 研究意义 | 第24页 |
| 1.5.2 主要研究内容 | 第24-26页 |
| 第二章 里氏木霉内质网蛋白折叠途经改造 | 第26-58页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-45页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第26-27页 |
| 2.1.2 PCR引物 | 第27-30页 |
| 2.1.3 主要实验仪器和试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.4 主要培养基和培养条件 | 第31-33页 |
| 2.1.5 分子生物学操作方法 | 第33-39页 |
| 2.1.6 bip1、pdi1、ero1、gpt1及g1s2过表达载体构建 | 第39-41页 |
| 2.1.7 mns1敲除质粒构建 | 第41-42页 |
| 2.1.8 里氏木霉的遗传转化 | 第42-43页 |
| 2.1.9 转化子的筛选鉴定 | 第43-44页 |
| 2.1.10 纤维素酶活测定 | 第44-45页 |
| 2.1.11 生物信息学软件及分析 | 第45页 |
| 2.2 实验结果与分析 | 第45-56页 |
| 2.2.1 基因序列分析 | 第45-46页 |
| 2.2.2 bip1、pdi1、ero1、gpt1及g1s2过表达菌株构建 | 第46-49页 |
| 2.2.3 mns1敲除菌株构建 | 第49-51页 |
| 2.2.4 内质网蛋白折叠途径改造相关基因转录量分析 | 第51-52页 |
| 2.2.5 内质网蛋白折叠途径改造菌株蛋白折叠加工水平的检测 | 第52页 |
| 2.2.6 不同碳源条件下,不同浓度DTT对遗传改造菌株的生长影响 | 第52-53页 |
| 2.2.7 不同浓度DTT对遗传改造菌株的BGL活力影响分析 | 第53-54页 |
| 2.2.8 内质网蛋白折叠途径改造对里氏木霉纤维素酶活力的影响 | 第54-56页 |
| 2.3 本章小结 | 第56-58页 |
| 第三章 里氏木霉异源表达黑曲霉β-葡萄糖苷酶BGLA的研究 | 第58-74页 |
| 3.1 材料与方法 | 第58-62页 |
| 3.1.1 所用菌株和质粒 | 第58-59页 |
| 3.1.2 PCR引物 | 第59页 |
| 3.1.3 主要实验仪器和试剂 | 第59-60页 |
| 3.1.4 主要培养基和培养条件 | 第60页 |
| 3.1.5 分子生物学操作方法 | 第60页 |
| 3.1.6 黑曲霉bg1A过表达盒构建 | 第60-61页 |
| 3.1.7 黑曲霉bg1A过表达载体转化里氏木霉 | 第61页 |
| 3.1.8 转化子的筛选鉴定 | 第61页 |
| 3.1.9 纤维素酶活力测定 | 第61页 |
| 3.1.10 预处理玉米芯残渣的糖化 | 第61-62页 |
| 3.1.11 转糖基反应 | 第62页 |
| 3.1.12 转糖基产物薄层层析分析(TLC)及剩余葡萄糖含量测定 | 第62页 |
| 3.2 实验结果与分析 | 第62-73页 |
| 3.2.1 黑曲霉β-葡萄糖苷酶BGLA过表达菌株构建 | 第62-63页 |
| 3.2.2 黑曲霉BGLA过表达菌株SCB18纤维素平板分析 | 第63-64页 |
| 3.2.3 黑曲霉BGLA过表达菌株七叶苷平板显色及SDS-PAGE分析 | 第64-65页 |
| 3.2.4 黑曲霉BGLA过表达菌株纤维素酶活分析 | 第65-67页 |
| 3.2.5 黑曲霉bg1A基因、里氏木霉cbh1基因的表达水平检测 | 第67-68页 |
| 3.2.6 UPR及ERAD途径相关因子的表达水平检测 | 第68-69页 |
| 3.2.7 里氏木霉SCB18菌株纤维素酶糖化结果分析 | 第69-70页 |
| 3.2.8 里氏木霉SCB18菌株发酵酶液转糖基能力探究 | 第70-72页 |
| 3.2.9 混合糖液的纤维素酶诱导能力探究 | 第72-73页 |
| 3.3 本章小结 | 第73-74页 |
| 第四章 里氏木霉异源表达毛栓菌漆酶Lcc1的研究 | 第74-84页 |
| 4.1 材料与方法 | 第74-77页 |
| 4.1.1 菌株和质粒 | 第74-75页 |
| 4.1.2 PCR引物 | 第75页 |
| 4.1.3 主要实验仪器和试剂 | 第75-76页 |
| 4.1.4 主要培养基和培养条件 | 第76页 |
| 4.1.5 分子生物学操作方法 | 第76页 |
| 4.1.6 毛栓菌漆酶Lcc1过表达载体构建 | 第76页 |
| 4.1.7 毛栓菌lcc1过表达载体转化里氏木霉 | 第76页 |
| 4.1.8 转化子的筛选鉴定 | 第76-77页 |
| 4.1.9 转化子的ABTS平板显色分析 | 第77页 |
| 4.1.10 漆酶活力测定 | 第77页 |
| 4.2 实验结果与分析 | 第77-82页 |
| 4.2.1 毛栓菌漆酶Lcc1过表达菌株构建 | 第77-78页 |
| 4.2.2 毛栓菌漆酶Lcc1过表达菌株的ABTS平板显色分析 | 第78-79页 |
| 4.2.3 毛栓菌漆酶Lcc1过表达菌株的漆酶活力测定 | 第79页 |
| 4.2.4 毛栓菌漆酶lcc1基因的转录水平检测 | 第79-80页 |
| 4.2.5 UPR响应及ERAD途径相关基因的转录水平检测 | 第80-82页 |
| 4.3 本章小结 | 第82-84页 |
| 第五章 毛栓菌漆酶Lcc1糖基化对蛋白表达和酶性质的影响 | 第84-92页 |
| 5.1 材料与方法 | 第84-88页 |
| 5.1.1 菌株和质粒 | 第84页 |
| 5.1.2 PCR引物 | 第84-85页 |
| 5.1.3 主要实验仪器和试剂 | 第85页 |
| 5.1.4 主要培养基和培养条件 | 第85-86页 |
| 5.1.5 分子生物学操作方法 | 第86页 |
| 5.1.6 毛栓菌漆酶Lcc1及其突变体过表达载体构建 | 第86-87页 |
| 5.1.7 转化子的筛选 | 第87页 |
| 5.1.8 漆酶蛋白纯化 | 第87-88页 |
| 5.1.9 漆酶活力测定 | 第88页 |
| 5.2 实验结果与分析 | 第88-90页 |
| 5.2.1 过表达载体验证 | 第88页 |
| 5.2.2 lcc1基因及突变基因过表达菌株转化子筛选 | 第88-89页 |
| 5.2.3 漆酶Lcc1及其突变体蛋白的纯化 | 第89-90页 |
| 5.2.4 未突变漆酶Lcc1性质分析 | 第90页 |
| 5.3 本章小结 | 第90-92页 |
| 全文总结 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-100页 |
| 致谢 | 第100-102页 |
| 附录 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第102-103页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第103页 |
