| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第15-31页 |
| 第一章 干细胞衰老与内质网应激 | 第15-25页 |
| 1.1 干细胞的衰老机制 | 第15-18页 |
| 1.1.1 端粒缩短 | 第15-16页 |
| 1.1.2 DNA损伤 | 第16页 |
| 1.1.3 致癌基因活化 | 第16页 |
| 1.1.4 氧化应激 | 第16-17页 |
| 1.1.5 表观遗传学改变 | 第17页 |
| 1.1.6 蛋白质组内稳态失衡 | 第17-18页 |
| 1.2 干细胞的衰老表型 | 第18-21页 |
| 1.2.1 DNA损伤应答 | 第18页 |
| 1.2.2 细胞周期停滞 | 第18-19页 |
| 1.2.3 衰老细胞分泌表型 | 第19-20页 |
| 1.2.4 细胞形态改变 | 第20页 |
| 1.2.5 溶酶体容积增大 | 第20页 |
| 1.2.6 分化能力降低 | 第20-21页 |
| 1.2.7 其它衰老表型 | 第21页 |
| 1.3 衰老与内质网应激 | 第21-24页 |
| 1.4 展望 | 第24-25页 |
| 第二章 褪黑素抗衰老作用机制的研究进展 | 第25-31页 |
| 2.1 褪黑素调节生物节律 | 第25-27页 |
| 2.2 褪黑素的抗氧化作用 | 第27-28页 |
| 2.3 褪黑素对Nrf2的激活作用 | 第28-29页 |
| 2.4 褪黑素的抗内质网应激作用 | 第29页 |
| 2.5 展望 | 第29-31页 |
| 试验研究 | 第31-90页 |
| 第三章 褪黑素延缓犬脂肪间充质干细胞衰老的作用效果 | 第31-51页 |
| 3.1 材料 | 第31-33页 |
| 3.1.1 试验动物、细胞和主要试剂 | 第31-33页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第33页 |
| 3.2 方法 | 第33-40页 |
| 3.2.1 细胞分离、培养、传代与鉴定 | 第33-34页 |
| 3.2.2 衰老相关β半乳糖苷酶染色 | 第34-35页 |
| 3.2.3 端粒酶活性检测 | 第35页 |
| 3.2.4 相对端粒长度检测 | 第35-36页 |
| 3.2.5 细胞群体倍增时间检测 | 第36页 |
| 3.2.6 细胞免疫荧光染色 | 第36页 |
| 3.2.7 核质比检测 | 第36页 |
| 3.2.8 体外诱导cADSCs向成骨细胞和软骨细胞分化 | 第36-38页 |
| 3.2.9 细胞总RNA提取、cDNA合成及real-timePCR | 第38-39页 |
| 3.2.10 蛋白提取、westernblot检测 | 第39-40页 |
| 3.2.11 Mel溶液的配置与细胞处理方法 | 第40页 |
| 3.2.12 数据分析 | 第40页 |
| 3.3 结果 | 第40-49页 |
| 3.3.1 cADSCs体外传代衰老模型的建立 | 第40-41页 |
| 3.3.2 Mel延缓cADSCs体外传代的衰老表型 | 第41-44页 |
| 3.3.3 Mel延缓体外传代衰老cADSCs的ERS和SASP | 第44-46页 |
| 3.3.4 ERS抑制剂4-PBA延缓体外传代cADSCs的衰老表型 | 第46-49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-50页 |
| 3.5 小结 | 第50-51页 |
| 第四章 褪黑素激活犬脂肪间充质干细胞Nrf2基因的节律性表达 | 第51-60页 |
| 4.1 材料 | 第51页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第51页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第51页 |
| 4.2 方法 | 第51-52页 |
| 4.2.1 cADSCs的分离培养及同步化处理 | 第51-52页 |
| 4.2.2 细胞总RNA提取、cDNA合成及real-timePCR | 第52页 |
| 4.2.3 蛋白提取、westernblot检测 | 第52页 |
| 4.3 结果 | 第52-58页 |
| 4.3.1 cADSCs的体外传代衰老伴随节律性基因表达减弱 | 第52-54页 |
| 4.3.2 Mel激活cADSCs中Nrf2基因的节律性表达 | 第54-56页 |
| 4.3.3 Mel调节cADSCs中ERS相关基因的节律性表达 | 第56-58页 |
| 4.4 讨论 | 第58-59页 |
| 4.5 小结 | 第59-60页 |
| 第五章 褪黑素通过激活犬脂肪间充质干细胞Nrf2基因上调ERAD途径 | 第60-72页 |
| 5.1 材料 | 第60-61页 |
| 5.1.1 细胞和主要试剂 | 第60-61页 |
| 5.1.2 主要仪器设备 | 第61页 |
| 5.2 方法 | 第61-63页 |
| 5.2.1 细胞总RNA提取、cDNA合成及real-timePCR | 第61页 |
| 5.2.2 双荧光素酶报告基因检测 | 第61-62页 |
| 5.2.3 细胞核、质蛋白提取 | 第62页 |
| 5.2.4 shNrf2干扰细胞株的构建 | 第62-63页 |
| 5.2.5 细胞免疫荧光染色 | 第63页 |
| 5.2.6 蛋白提取、westernblot检测 | 第63页 |
| 5.3 结果 | 第63-70页 |
| 5.3.1 Mel通过受体MT1/MT2激活cADSCs中Nrf2基因的表达 | 第63-66页 |
| 5.3.2 Mel通过MT1/MT2激活cADSCs中ERAD相关基因的表达 | 第66页 |
| 5.3.3 Mel通过Nrf2激活cADSCs中ERAD相关基因的表达 | 第66-68页 |
| 5.3.4 Mel通过激活cADSCs中Nrf2和ERAD相关基因的表达抑制ERS | 第68-70页 |
| 5.4 讨论 | 第70-71页 |
| 5.5 小结 | 第71-72页 |
| 第六章 褪黑素通过激活犬脂肪间充质干细胞的Nrf2抑制NF-κB信号通路 | 第72-79页 |
| 6.1 材料 | 第72-73页 |
| 6.1.1 细胞和主要试剂 | 第72页 |
| 6.1.2 主要仪器设备 | 第72-73页 |
| 6.2 方法 | 第73页 |
| 6.2.1 细胞总RNA提取、cDNA合成及real-timePCR | 第73页 |
| 6.2.2 双荧光素酶报告基因检测 | 第73页 |
| 6.2.3 蛋白提取、westernblot检测 | 第73页 |
| 6.3 结果 | 第73-76页 |
| 6.3.1 Mel通过受体MT1/MT2抑制cADSCs中的SASP和NF-κB信号通路 | 第73-75页 |
| 6.3.2 Mel通过激活cADSCs的Nrf2抑制SASP和NF-κB信号通路 | 第75-76页 |
| 6.4 讨论 | 第76-77页 |
| 6.5 小结 | 第77-79页 |
| 第七章 褪黑素预处理对犬脂肪间充质干细胞异体移植疗效的影响 | 第79-90页 |
| 7.1 材料 | 第79-80页 |
| 7.1.1 试验动物、细胞和主要试剂 | 第79-80页 |
| 7.1.2 主要仪器设备 | 第80页 |
| 7.2 方法 | 第80-82页 |
| 7.2.1 犬急性肝损伤模型的制作 | 第80页 |
| 7.2.2 试验分组和细胞移植 | 第80页 |
| 7.2.3 细胞荧光标记 | 第80-81页 |
| 7.2.4 血清学检测 | 第81页 |
| 7.2.5 肝脏指数的计算 | 第81页 |
| 7.2.6 冰冻切片制备 | 第81页 |
| 7.2.7 石蜡切片制备与HE染色 | 第81页 |
| 7.2.8 肝脏急性损伤评分方法 | 第81-82页 |
| 7.2.9 组织总RNA提取、cDNA合成及real-timePCR | 第82页 |
| 7.3 结果 | 第82-87页 |
| 7.3.1 犬急性肝损伤模型的建立 | 第82-84页 |
| 7.3.2 Mel预处理提高cADSCs异体移植在肝脏的存活率 | 第84页 |
| 7.3.3 Mel预处理提高cADSCs异体移植的疗效 | 第84-86页 |
| 7.3.4 Mel预处理的cADSCs异体移植对肝脏组织ERS的影响 | 第86-87页 |
| 7.4 讨论 | 第87-88页 |
| 7.5 小结 | 第88-90页 |
| 结论 | 第90页 |
| 本论文的创新点 | 第90页 |
| 有待进一步研究的问题 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-108页 |
| 主要缩略词和中英文对照表(AbbreviationIndex) | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 作者简介 | 第110页 |
