| 摘要 | 第6-9页 |
| abstract | 第9-12页 |
| 文献综述 | 第17-27页 |
| 第一章 病毒诱导宿主细胞凋亡研究进展 | 第17-27页 |
| 1.1 病毒感染诱导细胞凋亡 | 第17-19页 |
| 1.1.1 病毒量与细胞凋亡 | 第17-18页 |
| 1.1.2 病毒抗体与细胞凋亡 | 第18-19页 |
| 1.2 病毒感染诱导细胞凋亡的信号转导通路 | 第19-24页 |
| 1.2.1 病毒感染诱导死亡受体通路研究 | 第19页 |
| 1.2.2 病毒感染诱导线粒体通路研究 | 第19-20页 |
| 1.2.3 病毒感染诱导p53信号转导通路研究 | 第20-22页 |
| 1.2.4 病毒感染诱导MAPKs信号转导通路研究 | 第22-24页 |
| 1.3 细小病毒诱导的细胞凋亡 | 第24-25页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第25-27页 |
| 试验研究 | 第27-90页 |
| 第二章 永生化猪黄体细胞系的建立与鉴定 | 第27-46页 |
| 2.1 试验材料 | 第27-29页 |
| 2.1.1 卵巢组织 | 第27页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第27页 |
| 2.1.3 质粒和细胞 | 第27页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.5 主要试剂的配置 | 第28页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 试验方法 | 第29-37页 |
| 2.2.1 原代猪黄体细胞的分离、纯化 | 第29页 |
| 2.2.2 3β-HSD活性染色和Oil-Red-O染色鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.3 猪黄体细胞的永生化 | 第30页 |
| 2.2.4 转染后的猪黄体细胞端粒酶基因表达及活性鉴定 | 第30-32页 |
| 2.2.5 核型分析 | 第32页 |
| 2.2.6 透射电子显微镜观察 | 第32-33页 |
| 2.2.7 3β-HSD活性染色和Oil-Red-O染色鉴定转染后黄体细胞 | 第33页 |
| 2.2.8 台盼蓝法鉴定细胞活性 | 第33页 |
| 2.2.9 RT-PCR法检测类固醇激素合成相关分子的表达 | 第33-35页 |
| 2.2.10 放射免疫法检测LH和氯前列烯醇刺激后孕酮的产生 | 第35-36页 |
| 2.2.11 Westernblotting法检测LH和氯前列烯醇刺激后孕酮合成过程中关键蛋白和酶的表达 | 第36页 |
| 2.2.12 软琼脂试验及裸鼠致瘤试验 | 第36页 |
| 2.2.13 统计学分析 | 第36-37页 |
| 2.3 结果 | 第37-43页 |
| 2.3.1 永生化猪黄体细胞系的建立 | 第37-39页 |
| 2.3.2 永生化猪黄体细胞形态学特征的鉴定 | 第39页 |
| 2.3.3 类固醇激素合成过程中相关分子的表达 | 第39-41页 |
| 2.3.4 LH和氯前列烯醇对黄体细胞孕酮合成的影响 | 第41-42页 |
| 2.3.5 体内和体外致瘤性分析 | 第42-43页 |
| 2.4 讨论 | 第43-45页 |
| 2.5 小结 | 第45-46页 |
| 第三章 猪细小病毒诱导猪黄体细胞凋亡信号转导通路研究 | 第46-66页 |
| 3.1 试验材料 | 第46-47页 |
| 3.1.1 病毒和细胞 | 第46页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第46-47页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第47页 |
| 3.2 试验方法 | 第47-53页 |
| 3.2.1 PPV的扩增及病毒滴度的测定 | 第47-48页 |
| 3.2.2 MTT法检测PPV对黄体细胞细胞活性的影响 | 第48页 |
| 3.2.3 qPCR法检测PPV在黄体细胞中的增殖 | 第48-50页 |
| 3.2.4 PPV感染对黄体细胞损伤的形态观察 | 第50页 |
| 3.2.5 DNA片段化分析 | 第50页 |
| 3.2.6 流式细胞术检测 | 第50-51页 |
| 3.2.7 分光光度法检测caspase的活性 | 第51页 |
| 3.2.8 抑制剂预处理猪黄体细胞 | 第51页 |
| 3.2.9 Westernblotting法检测死亡受体和线粒体通路主要相关蛋白的表达 | 第51-52页 |
| 3.2.10 RT-PCR法检测p53转录水平的变化 | 第52-53页 |
| 3.2.11 Westernblotting法检测p53蛋白表达和转位以及p38MAPK、JNK总蛋白和蛋白磷酸化水平变化情况 | 第53页 |
| 3.2.12 p53siRNA转染猪黄体细胞 | 第53页 |
| 3.2.13 统计学分析 | 第53页 |
| 3.3 结果 | 第53-63页 |
| 3.3.1 PPV感染对黄体细胞活性的影响 | 第53-54页 |
| 3.3.2 PPV在黄体细胞中的增殖 | 第54页 |
| 3.3.3 PPV感染诱导原代和永生化黄体细胞凋亡 | 第54-56页 |
| 3.3.4 PPV感染经线粒体通路诱导原代和永生化黄体细胞凋亡 | 第56-59页 |
| 3.3.5 p53参与调控PPV诱导的黄体细胞凋亡 | 第59-61页 |
| 3.3.6 PPV诱导黄体细胞中的p38MAPK发生磷酸化 | 第61-63页 |
| 3.3.7 磷酸化p38参与调控PPV感染引起的黄体细胞凋亡 | 第63页 |
| 3.4 讨论 | 第63-65页 |
| 3.5 小结 | 第65-66页 |
| 第四章 猪细小病毒抑制猪黄体细胞孕酮产生机制研究 | 第66-75页 |
| 4.1 试验材料 | 第66页 |
| 4.1.1 病毒和细胞 | 第66页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第66页 |
| 4.2 试验方法 | 第66-69页 |
| 4.2.1 放射免疫法检测孕酮的产生 | 第66-67页 |
| 4.2.2 Real-timePCR法检测黄体细胞中孕酮合成关键蛋白和酶的表达 | 第67-68页 |
| 4.2.3 Westernblotting法检测黄体细胞中孕酮合成关键蛋白和酶的表达 | 第68页 |
| 4.2.4 放射免疫法检测特异性抑制剂预处理后PPV感染对黄体细胞孕酮产生的影响 | 第68-69页 |
| 4.2.5 统计学分析 | 第69页 |
| 4.3 结果 | 第69-73页 |
| 4.3.1 PPV感染抑制原代和永生化黄体细胞孕酮产生 | 第69-70页 |
| 4.3.2 PPV感染对黄体细胞孕酮合成的影响 | 第70-71页 |
| 4.3.3 调控PPV感染诱导黄体细胞凋亡过程的相关因子对黄体细胞孕酮产生的影响 | 第71-73页 |
| 4.4 讨论 | 第73-74页 |
| 4.5 小结 | 第74-75页 |
| 第五章 猪细小病毒感染诱导初孕母猪黄体细胞凋亡及抑制孕酮产生研究 | 第75-90页 |
| 5.1 试验材料 | 第75-77页 |
| 5.1.1 病毒和细胞 | 第75页 |
| 5.1.2 实验动物 | 第75页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第75-76页 |
| 5.1.4 主要试剂的配置 | 第76页 |
| 5.1.5 主要仪器 | 第76-77页 |
| 5.2 试验方法 | 第77-80页 |
| 5.2.1 人工感染PPV | 第77页 |
| 5.2.2 血清中PPV抗体水平的检测 | 第77页 |
| 5.2.3 血清中孕酮含量的检测 | 第77-78页 |
| 5.2.4 原位杂交法检测PPV在黄体组织中的分布及复制情况的确定 | 第78-79页 |
| 5.2.5 Westernblotting法检测黄体组织中PPV的表达 | 第79页 |
| 5.2.6 HE染色 | 第79页 |
| 5.2.7 TUNEL染色 | 第79-80页 |
| 5.2.8 透射电子显微镜观察黄体组织细胞超微结构变化 | 第80页 |
| 5.2.9 Westernblotting法检测黄体组织中细胞凋亡信号转导通路主要相关蛋白的表达 | 第80页 |
| 5.2.10 Real-timePCR法检测黄体组织中孕酮合成过程中关键蛋白和酶基因的表达 | 第80页 |
| 5.2.11 Westernblotting法检测黄体组织中孕酮合成过程中关键蛋白及酶的表达. | 第80页 |
| 5.2.12 统计学分析 | 第80页 |
| 5.3 结果 | 第80-88页 |
| 5.3.1 人工感染PPV不同时间妊娠猪血清中PPV抗体水平的变化 | 第80-81页 |
| 5.3.2 人工感染PPV不同时间妊娠猪血清中孕酮水平的变化 | 第81-82页 |
| 5.3.3 人工感染PPV不同时间对初孕猪卵巢大体剖检观察结果 | 第82页 |
| 5.3.4 人工感染PPV后PPV在黄体组织中复制及病毒载量的观察 | 第82-83页 |
| 5.3.5 人工感染PPV不同时间对初孕母猪黄体组织损伤和细胞凋亡的影响 | 第83-84页 |
| 5.3.6 人工感染PPV对初孕母猪黄体组织细胞超微结构的影响 | 第84-85页 |
| 5.3.7 人工感染PPV通过线粒体通路介导黄体组织中细胞凋亡 | 第85-86页 |
| 5.3.8 人工感染PPV促进p53蛋白在黄体组织细胞中的积累 | 第86页 |
| 5.3.9 人工感染PPV诱导黄体组织细胞中p38蛋白发生磷酸化 | 第86-87页 |
| 5.3.10 人工感染PPV不同时间对初孕母猪黄体组织中孕酮合成相关蛋白和酶表达的影响 | 第87-88页 |
| 5.4 讨论 | 第88-89页 |
| 5.5 小结 | 第89-90页 |
| 结论 | 第90-91页 |
| 创新点 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-107页 |
| 英文缩略词及中英文对照 | 第107-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 作者简介 | 第110-111页 |
