| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-33页 |
| 1.1 组蛋白翻译后修饰 | 第13-14页 |
| 1.2 非组蛋白翻译后修饰 | 第14-25页 |
| 1.2.1 蛋白质SUMO修饰(类泛素化修饰)及SUMO修饰的酶系 | 第15-16页 |
| 1.2.2 SUMO修饰过程 | 第16-17页 |
| 1.2.3 SUMO修饰位点 | 第17-19页 |
| 1.2.4 已经鉴定出的SUMO修饰底物蛋白及功能 | 第19-20页 |
| 1.2.5 SUMO修饰与转录调控 | 第20-22页 |
| 1.2.6 PIAS家族蛋白 | 第22-25页 |
| 1.3 哺乳动物细胞转录调控 | 第25-30页 |
| 1.3.1 RNAPⅡCTD | 第26-28页 |
| 1.3.2 P-TEFb.7SK.HEXIM复合体 | 第28-30页 |
| 1.4 MYC | 第30-33页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第33-73页 |
| 2.1 实验材料 | 第33-48页 |
| 2.1.1 实验细胞系及细胞培养 | 第33页 |
| 2.1.2 细菌 | 第33-34页 |
| 2.1.3 质粒信息 | 第34-35页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第35页 |
| 2.1.5 实验试剂 | 第35-38页 |
| 2.1.6 引物序列 | 第38-44页 |
| 2.1.7 实验相关试剂的配制 | 第44-48页 |
| 2.2 实验步骤 | 第48-73页 |
| 2.2.1 分子克隆 | 第48-58页 |
| 2.2.2 WesternBlot | 第58-59页 |
| 2.2.3 免疫染色(Immunofluorescencestaining) | 第59-60页 |
| 2.2.4 免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation) | 第60-61页 |
| 2.2.5 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第61-62页 |
| 2.2.6 BrUTPIncorporationAssay | 第62-63页 |
| 2.2.7 核质分离 | 第63-64页 |
| 2.2.8 组蛋白抽提 | 第64-65页 |
| 2.2.9 真核细胞基因组抽提 | 第65-66页 |
| 2.2.10 稳系构建 | 第66-67页 |
| 2.2.11 CRISPR-Cas9基因敲除 | 第67-68页 |
| 2.2.12 PTEFb.7SK.Hexim1复合体中7SKsnRNA含量检测 | 第68-69页 |
| 2.2.13 RT-qPCR | 第69页 |
| 2.2.14 GST-tag原核蛋白分离纯化 | 第69-70页 |
| 2.2.15 考马斯亮蓝染色 | 第70-71页 |
| 2.2.16 银染 | 第71页 |
| 2.2.17 体外CDK9激酶活性检测 | 第71-72页 |
| 2.2.18 体外SUMO修饰反应 | 第72页 |
| 2.2.19 体外去乙酰化酶活性检测 | 第72-73页 |
| 第三章 SUMO修饰抑制细胞整体转录的机理研究 | 第73-113页 |
| 3.1 引言 | 第73-75页 |
| 3.2 实验结果 | 第75-111页 |
| 3.2.1 SUMO抑制AR转录活性并不依赖于AR发生SUMO修饰 | 第75-76页 |
| 3.2.2 PIAS1可能通过介导CDK9SUMO修饰,来抑制PolⅡCTDser2P水平 | 第76-79页 |
| 3.2.3 体内、体外实验证明CDK9能够发生SUMO修饰、并且CDK9SUMO修饰能抑制PolⅡSer2P | 第79-84页 |
| 3.2.4 CDK9发生SUMO修饰能够抑制P-TEFb复合体形成 | 第84-87页 |
| 3.2.5 SUMO通过抑制转录延伸抑制整体转录水平 | 第87-90页 |
| 3.2.6 RNA-Seq、ChIP-Seq实验进一步表明SUMO通过抑制转录延伸抑制整体转录水平 | 第90-95页 |
| 3.2.7 多数PIAS家族蛋白在介导CDK9SUMO修饰及抑制细胞整体转录上存在冗余性 | 第95-97页 |
| 3.2.8 SUMO主要是通过介导CDK9SUMO修饰抑制整体转录水平 | 第97-101页 |
| 3.2.9 MYC通过拮抗CDK9SUMO修饰促进细胞内整体转录延伸 | 第101-103页 |
| 3.2.10 MYC通过与CDK9竞争结合SUMO酶系、拮抗CDK9SUMO修饰 | 第103-105页 |
| 3.2.11 MYC主要通过拮抗CDK9的SUMO修饰,而促进细胞整体转录延伸 | 第105-108页 |
| 3.2.12 该课题的生理、病理学意义 | 第108-111页 |
| 3.3 总结与讨论 | 第111-113页 |
| 第四章 SUMO修饰抑制细胞组蛋白乙酰化的机制研究 | 第113-152页 |
| 4.1 引言 | 第113-117页 |
| 4.2 实验结果 | 第117-149页 |
| 4.2.1 过表达PIASxβ和SUMO-1能够特异性抑制组蛋白乙酰化水平 | 第117-119页 |
| 4.2.2 PIASxβ介导组蛋白乙酰化水平抑制,依赖于其SUMOE3连接酶酶活性 | 第119-121页 |
| 4.2.3 在常见的SUMOE3连接酶中,仅有敲低PIASxβ能够显著增加组蛋白乙酰化 | 第121-123页 |
| 4.2.4 PIASxβ不能介导组蛋白H3、H4SUMO修饰,也不能抑制p300乙酰化酶活性 | 第123-125页 |
| 4.2.5 PIASxβ介导组蛋白乙酰化下调,能够被组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA所阻抑 | 第125-126页 |
| 4.2.6 PIASxβ特异性介导组蛋白去乙酰化酶HDAC1,HDAC2发生SUMO修饰 | 第126-129页 |
| 4.2.7 在PIAS家族蛋白中,只有PIASxβ能够通过特异性介导内源HDAC1/2发生SUMO修饰抑制组蛋白乙酰化 | 第129-132页 |
| 4.2.8 体内、体外实验发现PIASxβ介导HDAC1/2发生SUMO修饰,促进其组蛋白去乙酰化酶活性 | 第132-135页 |
| 4.2.9 体内、体外实验发现SUMO修饰Mimic的HDAC1/2显著增强了其组蛋白去乙酰化酶活性 | 第135-138页 |
| 4.2.10 过表达或者敲低PIASxβ并不影响HDAC1/2/3转录水平 | 第138-140页 |
| 4.2.11 敲低PIASxβ能够促进HDAC1/2降解 | 第140-142页 |
| 4.2.12 PIASxβ介导HDAC1/2发生SUMO修饰,促进HDAC1/2染色质定位 | 第142-146页 |
| 4.2.13 PIASxβ介导的HDAC1/2SUMO修饰对含有HDAC1/2复合体Sin3A,NuRD的形成没有影响 | 第146-148页 |
| 4.2.14 PIASxβ特异性介导HDAC1/2SUMO修饰,抑制组蛋白乙酰化的病理学意义 | 第148-149页 |
| 4.3 总结与讨论 | 第149-152页 |
| 参考文献 | 第152-166页 |
| 博士在读期间发表文章目录 | 第166-167页 |
| 致谢与结语 | 第167-169页 |
