| 致谢 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 1. 文献综述 | 第9-18页 |
| 1.1 烟草基因工程技术研究现状 | 第9-11页 |
| 1.1.1 植物基因工程技术研究概述 | 第9页 |
| 1.1.2 烟草基因工程研究进展 | 第9-11页 |
| 1.2 植物非甲羟戊酸途径研究进展及在烟草中的应用前景 | 第11-18页 |
| 1.2.1 萜类物质概述 | 第11页 |
| 1.2.2 植物非甲羟戊酸途径的发现 | 第11-13页 |
| 1.2.3 非甲羟戊酸关键酶研究进展 | 第13-18页 |
| 1.2.3.1 DXS 酶研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.3.2 DXR 酶研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2.3.3 CMS，CMK，MCS 酶研究进展 | 第16页 |
| 1.2.3.4 植物非甲羟戊酸途径研究在烟草中的应用前景 | 第16-18页 |
| 2. 引言 | 第18-19页 |
| 3. 实验材料与方法 | 第19-31页 |
| 3.1 实验仪器设备 | 第19页 |
| 3.2 植物材料 | 第19页 |
| 3.3 实验材料 | 第19-22页 |
| 3.3.1 试剂、载体和菌株 | 第19页 |
| 3.3.2 常用试剂配制 | 第19-21页 |
| 3.3.3 常用培养基配制 | 第21-22页 |
| 3.4 烟草总RNA 的抽提和检测 | 第22-24页 |
| 3.4.1 烟草总RNA 的提取 | 第22-23页 |
| 3.4.2 RNA 的质量及纯度的检测 | 第23-24页 |
| 3.4.2.1 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第23页 |
| 3.4.2.2 分光光度计RNA 定量及纯度分析 | 第23-24页 |
| 3.5 烟草dxr 基因的克隆 | 第24-26页 |
| 3.5.1 第一链cDNA 的合成 | 第24页 |
| 3.5.2 dxr 基因引物的设计 | 第24页 |
| 3.5.3 PCR 反应体系及反应条件 | 第24-25页 |
| 3.5.4 PCR 产物的回收和克隆 | 第25页 |
| 3.5.5 重组克隆的验证及序列测定 | 第25-26页 |
| 3.6 dxr 基因的原核表达与Western Blot 分析 | 第26-27页 |
| 3.6.1 dxr 基因的原核表达 | 第26页 |
| 3.6.2 dxr 基因的 Western Blot 分析 | 第26-27页 |
| 3.7 dxr 基因表达时空特异性 | 第27页 |
| 3.7.1 dxr 基因组织特异性的研究 | 第27页 |
| 3.7.2 dxr 基因不同发育时期表达特异性研究 | 第27页 |
| 3.8 烟草 DXR 的生物信息学分析 | 第27-28页 |
| 3.9 dxr 基因转化烟草 | 第28-31页 |
| 3.9.1 dxr 基因表达载体的构建 | 第28页 |
| 3.9.2 根癌农杆菌LBA4404 感受态制备 | 第28-29页 |
| 3.9.3 重组质粒pCAMBIA2300-35S-OCS-DXR 转化农杆菌 | 第29页 |
| 3.9.4 农杆菌中DXR 序列的PCR 检测 | 第29页 |
| 3.9.5 农杆菌LBA4404 介导的dxr 基因转化烟草阳性植株的获得 | 第29-30页 |
| 3.9.5.1 烟草无菌组培苗的培育 | 第29-30页 |
| 3.9.5.2 转化农杆菌侵染烟草组培苗 | 第30页 |
| 3.9.6 dxr 转基因烟草的分子鉴定 | 第30-31页 |
| 3.9.6.1 改良CTAB 法转化烟草DNA 的提取 | 第30-31页 |
| 3.9.6.2 转化烟草的PCR 检测 | 第31页 |
| 4 结果与分析 | 第31-43页 |
| 4.1 RNA 提取 | 第31-32页 |
| 4.2 dxr 基因RT-PCR 电泳结果分析 | 第32-34页 |
| 4.3 DXR 蛋白的同源性分析 | 第34-36页 |
| 4.4 DXR 蛋白的进化分析 | 第36-38页 |
| 4.5 烟草dxr 基因的原核表达及Western Blot 分析 | 第38-39页 |
| 4.6 烟草dxr 基因表达时空特异性 | 第39-40页 |
| 4.6.1 烟草 dxr 基因组织特异性表达特征 | 第39-40页 |
| 4.6.2 烟草 dxr 基因发育规律 | 第40页 |
| 4.7 dxr 转化农杆菌 PCR 检测 | 第40-41页 |
| 4.8 dxr 基因转化烟草阳性植株的获得 | 第41-42页 |
| 4.9 dxr 转基因烟草的 PCR 检测 | 第42-43页 |
| 5.结论与讨论 | 第43-45页 |
| 参考文献 | 第45-56页 |
| 英文摘要 | 第56-57页 |
