| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-21页 |
| 1 研究问题的由来 | 第11页 |
| 2 文献综述 | 第11-20页 |
| 2.1 miRNA的发现 | 第11-12页 |
| 2.2 miRNA的特征、生成及作用机制 | 第12-14页 |
| 2.3 miRNA的生物学功能 | 第14-16页 |
| 2.3.1 调节细胞早期的发育 | 第14页 |
| 2.3.2 参与细胞分化和组织发育 | 第14-15页 |
| 2.3.3 调控基因表达 | 第15-16页 |
| 2.4 猪新miRNA的寻找及鉴定 | 第16-17页 |
| 2.5 荧光素酶报告基因载体 | 第17-19页 |
| 2.5.1 pGL3 | 第17-18页 |
| 2.5.2 phRL系列合成海肾萤光素酶报告基因载体 | 第18页 |
| 2.5.4 psiCHECKTM-1和psiCHECKTM-2载体 | 第18-19页 |
| 2.6 标签融合蛋白 | 第19-20页 |
| 3 研究目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-36页 |
| 1 材料 | 第21-26页 |
| 1.1 组织样品 | 第21页 |
| 1.2 载体、菌株、细胞系 | 第21-22页 |
| 1.3 试剂盒和酶 | 第22-23页 |
| 1.4 主要试剂及配置 | 第23-25页 |
| 1.4.1 主要试剂 | 第23-25页 |
| 1.5 主要仪器设备及耗材 | 第25-26页 |
| 2 方法 | 第26-36页 |
| 2.1 猪miRNA的克隆验证及组织表达分析 | 第26-30页 |
| 2.1.1 miRNA特异性反转录引物及茎环引物设计 | 第26-27页 |
| 2.1.2 Stem-loop RT-PCR和克隆测序 | 第27-29页 |
| 2.1.3 miRNA组织表达定量检测 | 第29-30页 |
| 2.2 miRNA通用靶基因载体的构建 | 第30-32页 |
| 2.2.1 FLAG-GFP-N1表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.2 FLAG-GFP-pcDNA3.1表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.3 miRNA通用靶基因载体的验证 | 第32-36页 |
| 2.3.1 FLAG-GFP-PTEN-pcDNA3.1表达载体的构建 | 第32页 |
| 2.3.2 PTEN-psiCHECK-2表达载体的验证 | 第32-33页 |
| 2.3.3 FLAG-GFP-PTEN-pcDNA3.1表达载体的验证 | 第33-36页 |
| 第三章 结果 | 第36-44页 |
| 1 猪miRNA的克隆验证及组织表达分析 | 第36-37页 |
| 1.1 猪miRNA的克隆验证 | 第36页 |
| 1.2 猪miRNA的组织表达分析 | 第36-37页 |
| 2 miRNA通用靶基因载体的构建 | 第37-39页 |
| 2.1 FLAG-GFP-N1表达载体的构建 | 第37-38页 |
| 2.2 FLAG-GFP-pcDNA3.1表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 3 miRNA通用靶基因载体的验证 | 第39-44页 |
| 3.1 FLAG-GFP-PTEN-pcDNA3.1表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 3.2 PTEN-psiCHECK-2表达载体的验证 | 第40-41页 |
| 3.3 FLAG-GFP-PTEN-pcDNA3.1表达载体的验证 | 第41-44页 |
| 3.3.1 miR-29干扰FLAG-GFP-PTEN-pcDNA3.1后绿荧光蛋白的观察 | 第41-42页 |
| 3.3.2 miR-29干扰FLAG-GFP-PTEN-pcDNA3.1后的ELISA检测 | 第42-44页 |
| 第四章 讨论 | 第44-47页 |
| 4.1 关于miRNA的分离 | 第44页 |
| 4.2 关于miRNA的鉴定及组织表达分析结果的讨论 | 第44-45页 |
| 4.3 关于miRNA靶基因载体的构建 | 第45-46页 |
| 4.4 关于miRNA靶基因载体的验证 | 第46-47页 |
| 第五章 小结 | 第47-48页 |
| 5.1 本研究取得的成果 | 第47页 |
| 5.2 本研究的创新点 | 第47页 |
| 5.2 本研究的不足之处 | 第47页 |
| 5.4 下一步值得研究的问题 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 在读期间已发表或拟发表论文题录 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
