| 目录 | 第5-9页 |
| 术语和缩略语表 | 第9-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| ABSTRACT | 第13-14页 |
| 第1章 绪论 | 第15-28页 |
| 1.1 大型溞(Daphnia magna)的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.1.1 大型溞(Daphnia magna)概述 | 第15页 |
| 1.1.2 以大型溞为试验生物的生态毒性测定方法的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.2 胆碱酯酶的概述及作为生态毒理学指标在水生生物中的应用 | 第17-19页 |
| 1.2.1 胆碱酯酶概述 | 第17-18页 |
| 1.2.2 胆碱酯酶作为生态毒理学指标在水生生物中的应用 | 第18-19页 |
| 1.3 基因工程抗原的制备 | 第19-23页 |
| 1.3.1 原核细胞表达系统 | 第20-22页 |
| 1.3.2 真核微生物表达系统 | 第22页 |
| 1.3.3 昆虫细胞表达系统 | 第22页 |
| 1.3.4 哺乳动物细胞表达系统 | 第22-23页 |
| 1.4 抗体的制备方法 | 第23-24页 |
| 1.4.1 常规血清技术 | 第23页 |
| 1.4.2 杂交瘤技术 | 第23-24页 |
| 1.4.3 基因工程抗体技术 | 第24页 |
| 1.4.4 抗体库技术 | 第24页 |
| 1.5 农药残留的酶联免疫分析技术 | 第24-25页 |
| 1.5.1 间接法测定抗体 | 第25页 |
| 1.5.2 双抗体夹心法测抗原 | 第25页 |
| 1.5.3 竞争法测抗原 | 第25页 |
| 1.6 本研究的研究目的意义和研究的主要内容 | 第25-28页 |
| 1.6.1 研究目的意义 | 第25-27页 |
| 1.6.2 研究的主要内容 | 第27页 |
| 1.6.3 研究的预期目标 | 第27-28页 |
| 第2章 胆碱酯酶基因的克隆与表达及纯化 | 第28-47页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 材料与方法 | 第28-38页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第30-38页 |
| 2.3 结果与分析 | 第38-44页 |
| 2.3.1 总RNA的提取 | 第38-39页 |
| 2.3.2 胆碱酯酶基因序列的扩增 | 第39-40页 |
| 2.3.3 胆碱酯酶基因的克隆与鉴定 | 第40页 |
| 2.3.4 序列分析(717bp) | 第40-41页 |
| 2.3.5 重组表达质粒的构建、转化及阳性转化菌的筛选 | 第41-42页 |
| 2.3.6 胆碱酯酶基因在大肠杆菌的表达 | 第42页 |
| 2.3.7 表达蛋白的变性、纯化与复性 | 第42-43页 |
| 2.3.8 重组蛋白的活性鉴定 | 第43-44页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第44-47页 |
| 2.4.1 小结 | 第44页 |
| 2.4.2 讨论 | 第44-47页 |
| 第3章 大型溞重组CHE多克隆抗体的制备和ELISA方法的建立 | 第47-59页 |
| 3.1 试验材料 | 第47-48页 |
| 3.1.1 试剂及ELISA缓冲液 | 第47页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第47-48页 |
| 3.1.3 生物材料 | 第48页 |
| 3.2 试验方法 | 第48-52页 |
| 3.2.1 抗体的制备 | 第48-49页 |
| 3.2.2 测定表达ChE蛋白的间接非竞争ELISA方法的建立 | 第49-50页 |
| 3.2.3 大型溞ChE粗酶液以及其他样品间接非竞争ELISA方法基本操作步骤 | 第50-51页 |
| 3.2.4 建立的间接非竞争ELISA法的质量控制 | 第51-52页 |
| 3.3 结果与分析 | 第52-57页 |
| 3.3.1 抗血清的效价 | 第52页 |
| 3.3.2 大型溞重组ChE间接非竞争ELISA法的建立 | 第52-53页 |
| 3.3.3 测定大型溞ChE的间接非竞争ELISA法的质量控制 | 第53-55页 |
| 3.3.4 抗血清的特异性 | 第55-57页 |
| 3.4 讨论 | 第57-59页 |
| 第4章 三唑磷和水温暴露及反复冻融处理对大型溞体内胆碱酯酶含量的影响 | 第59-67页 |
| 4.1 引言 | 第59-60页 |
| 4.2 材料与方法 | 第60-62页 |
| 4.2.1 供试材料 | 第60-61页 |
| 4.2.2 试验方法 | 第61-62页 |
| 4.3 结果与分析 | 第62-65页 |
| 4.3.1 三唑磷暴露对大型溞ChE-IR的影响 | 第62-64页 |
| 4.3.2 温度暴露及取样后样品经反复冻融处理对大型溞ChE-IR的影响 | 第64-65页 |
| 4.4 讨论 | 第65-67页 |
| 4.4.1 三唑磷暴露对大型溞ChE-IR的影响 | 第65-66页 |
| 4.4.2 温度暴露及取样后样品经反复冻融对大型溞ChE-IR的影响 | 第66-67页 |
| 第5章 小结 | 第67-71页 |
| 5.1 大型溞ChE基因的克隆、表达及纯化 | 第67-68页 |
| 5.2 重组胆碱酯酶ChE多克隆抗体的制备和ELISA方法的建立 | 第68-69页 |
| 5.3 ELISA方法的适用性研究 | 第69页 |
| 5.3.1 三唑磷暴露对大型溞ChE-IR的影响 | 第69页 |
| 5.3.2 温度暴露及取样后样品经反复冻融对大型溞ChE-IR的影响 | 第69页 |
| 5.4 展望与不足 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
