| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-23页 |
| 1. 猪IFN-a研究进展 | 第9-16页 |
| ·干扰素的来源和分类 | 第9页 |
| ·IFN-a基因及诱导表达 | 第9-11页 |
| ·IFN-a生物学效应 | 第11-12页 |
| ·IFN-a作用机制 | 第12-15页 |
| ·IFN-a基因工程研究进展 | 第15-16页 |
| 2. 猪细小病毒疫苗研究进展 | 第16-19页 |
| ·常规疫苗 | 第17-18页 |
| ·新型疫苗 | 第18-19页 |
| 3 猪圆环病毒及疫苗研究进展 | 第19-23页 |
| ·PCV2概述 | 第19-20页 |
| ·PCV2疫苗研究概述 | 第20-21页 |
| ·基因工程疫苗研究进展 | 第21-23页 |
| 第二章 猪IFN-a基因的克隆及鉴定 | 第23-37页 |
| 1. 试验材料 | 第23-24页 |
| ·动物组织、菌株和载体 | 第23页 |
| ·主要试剂及溶液配制 | 第23-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| 2. 试验方法 | 第24-30页 |
| ·IFN-a引物的设计与合成 | 第24-25页 |
| ·猪肌肉组织基因组DNA的提取 | 第25-26页 |
| ·IFN-a基因的RT-PCR扩增 | 第26页 |
| ·PCR扩增产物的胶回收 | 第26-27页 |
| ·PCR产物克隆 | 第27-28页 |
| ·菌落筛选 | 第28页 |
| ·质粒pMD-IFN-a的抽提 | 第28-29页 |
| ·PCR鉴定及测序 | 第29页 |
| ·测序结果分析 | 第29-30页 |
| ·蛋白功能域和高级结构预测 | 第30页 |
| 3. 结果与分析 | 第30-37页 |
| ·总DNA抽提结果 | 第30页 |
| ·猪IFN-α基因扩增结果 | 第30-31页 |
| ·猪IFN-α基因序列分析结果 | 第31-35页 |
| ·蛋白功能、高级结构及突变效应预测 | 第35页 |
| ·编码蛋白信号肽预测 | 第35-37页 |
| 第三章 重组质粒PCI-IFN-a-ORF2-VP2融合表达核酸疫苗的构建 | 第37-44页 |
| 1. 试验材料 | 第37-38页 |
| ·菌株、质粒及细胞 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37-38页 |
| 2. 试验方法 | 第38-40页 |
| ·重组质粒pCI-IFN-a-ORF2-VP2构建的技术路线 | 第38-39页 |
| ·去除信号肽IFN-a基因引物设计与合成 | 第39页 |
| ·VP2基因的引物设计 | 第39页 |
| ·IFN-a的克隆 | 第39页 |
| ·IFN-a基因及质粒PCI-VP2-ORF2的酶切回收 | 第39-40页 |
| ·感受态E.coli DH5a的制备 | 第40页 |
| ·回收产物连接转化 | 第40页 |
| ·质粒抽提PCR扩增检测 | 第40页 |
| ·双酶切鉴定 | 第40页 |
| 3. 结果与分析 | 第40-44页 |
| ·去除信号肽IFN-a基因扩增与克隆载体的构建 | 第40-41页 |
| ·重组质粒PCI-IFN-a-ORF2-VP2真核表达载体的构建 | 第41-44页 |
| 第四章 质粒转染及重组质粒免疫原性检测 | 第44-55页 |
| 1. 试验材料 | 第44-45页 |
| ·主要试剂材料 | 第44页 |
| ·主要溶液及配方 | 第44页 |
| ·主要仪器设备 | 第44-45页 |
| 2. 试验方法 | 第45-49页 |
| ·重组质粒转染及表达产物的检测 | 第45-46页 |
| ·核酸疫苗免疫小鼠后免疫效力检测 | 第46-49页 |
| 3. 结果与分析 | 第49-55页 |
| ·转染PK15细胞免疫荧光检测表达产物 | 第49页 |
| ·脾脏淋巴细胞增殖情况 | 第49-50页 |
| ·外周血T淋巴细胞亚群的动态变化检测 | 第50-53页 |
| ·抗体检测 | 第53-55页 |
| 第五章 讨论 | 第55-59页 |
| 1 机体免疫应答机制 | 第55页 |
| 2 细胞因子作为基因佐剂 | 第55-57页 |
| 3 重组质粒核酸疫苗的免疫原性 | 第57-58页 |
| 4 实验中存在的问题及展望 | 第58-59页 |
| 第六章 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
