| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 縮略语表 | 第7-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第1章 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇简介及分析检测研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1.1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的理化性质 | 第12页 |
| 1.1.2 DON的产生及污染 | 第12-13页 |
| 1.1.3 DON的危害 | 第13-14页 |
| 1.1.4 DON的分析检测 | 第14-16页 |
| 1.2 通过噬菌体展示技术获得DON模拟表位 | 第16-17页 |
| 1.2.1 噬菌体展示技术 | 第16-17页 |
| 1.2.2 模拟表位 | 第17页 |
| 1.3 表达载体的构建及应用 | 第17-19页 |
| 1.3.1 pGEX-4T-1表达载体 | 第17-18页 |
| 1.3.2 pC89S4表达载体 | 第18-19页 |
| 1.4 研究内容与意义 | 第19-22页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第19-20页 |
| 1.4.2 研究意义 | 第20-22页 |
| 第2章 DON模拟表位两种表达载体的构建 | 第22-37页 |
| 2.1 主要实验材料、仪器和试剂 | 第23-25页 |
| 2.1.1 主要材料 | 第23-24页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第24页 |
| 2.1.3 生化试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.4 溶液和培养基 | 第25页 |
| 2.2 试验方法及步骤 | 第25-32页 |
| 2.2.1 制备冰冻感受态BL21(DE3),DH5α及XL1-Blue | 第25-26页 |
| 2.2.2 提取pGEX-4-1及pC89S4 | 第26-27页 |
| 2.2.3 pGEX-4-1及pC89S4的双酶切 | 第27页 |
| 2.2.4 双酶切产物的纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.5 质粒的回收 | 第28页 |
| 2.2.6 制备寡核苷酸双链 | 第28页 |
| 2.2.7 载体与目的片段的连接及转化 | 第28-30页 |
| 2.2.8 阳性克隆子的筛选 | 第30-32页 |
| 2.2.9 测序验证 | 第32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-35页 |
| 2.3.1 pGEX-4-1与pC89S4浓度测定 | 第32页 |
| 2.3.2 重组载体pGEX-4T-1-CDON和pC89S4-CDON单酶切后电泳 | 第32-34页 |
| 2.3.3 重组载体pGEX-4T-1-CDON和pC89S4-CDON测序结果 | 第34-35页 |
| 2.4 讨论论与小结 | 第35-37页 |
| 2.4.1 讨论 | 第35-36页 |
| 2.4.2 小结 | 第36-37页 |
| 第3章 PGEX-4T-1-CDON的表达优化 | 第37-48页 |
| 3.1 主要实验仪器和试剂 | 第37-39页 |
| 3.1.1 主要仪器 | 第37-38页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第38页 |
| 3.1.3 溶液和培养基 | 第38-39页 |
| 3.2 试验方法及步骤 | 第39-42页 |
| 3.2.1 GST-CDON融合蛋白的表达优化 | 第39-40页 |
| 3.2.2 SDS-PAGE检测GS-CDON融合蛋白的表达 | 第40-41页 |
| 3.2.3 GST-resin纯化GS-CDON融合蛋白 | 第41页 |
| 3.2.4 GS-CDON融合蛋白含量检测 | 第41-42页 |
| 3.3 结果与分析 | 第42-46页 |
| 3.3.1 不同诱导温度对GS-CDON表达量的影响 | 第42页 |
| 3.3.2 加入IPTG时不同菌体浓度对GS-CDON表达量的影响 | 第42-44页 |
| 3.3.3 不同IPTG浓度对GST-CDON表达量的影响 | 第44页 |
| 3.3.4 不同诱导时间对GST-CDON表达量的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.5 GST-CDON融合蛋白纯化 | 第45-46页 |
| 3.3.6 GST-CDON融合蛋白含量检测 | 第46页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第46-48页 |
| 3.4.1 讨论 | 第46-47页 |
| 3.4.2 小结 | 第47-48页 |
| 第4章 PC89S4-CDON的表达优化 | 第48-60页 |
| 4.1 主要材料、实验仪器和试剂 | 第48-50页 |
| 4.1.1 主要材料 | 第48页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第48-49页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第49页 |
| 4.1.4 溶液和培养基 | 第49-50页 |
| 4.2 试验方法及步骤 | 第50-54页 |
| 4.2.1 制备对KM13敏感的铺平板细菌 | 第50页 |
| 4.2.2 用KM13噬菌体铺平板 | 第50页 |
| 4.2.3 利用单个噬菌斑制备KM13噬菌体原种 | 第50-51页 |
| 4.2.4 测定KM13噬菌体滴度 | 第51页 |
| 4.2.5 噬菌体展示融合蛋白pⅧ-CDON的表达优化 | 第51-53页 |
| 4.2.6 展示有融合蛋白pⅧ-CDON的噬菌体的纯化 | 第53页 |
| 4.2.7 ELISA检测噬菌体展示的融合蛋白pⅧ-CDON | 第53-54页 |
| 4.3 结果与分析 | 第54-58页 |
| 4.3.1 辅助噬菌体KM13滴度测定 | 第54页 |
| 4.3.2 噬菌体展示融合蛋白pⅧ-CDON的表达优化 | 第54-58页 |
| 4.3.3 pⅧ-CDON融合蛋白的测定 | 第58页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第58-60页 |
| 4.4.1 讨论 | 第58页 |
| 4.4.2 小结 | 第58-60页 |
| 第5章 DON无毒ELISA检测方法的建立 | 第60-66页 |
| 5.1 主要实验仪器和试剂 | 第60-61页 |
| 5.1.1 主要仪器 | 第60页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第60页 |
| 5.1.3 溶液和培养基 | 第60-61页 |
| 5.2 试验方法及步骤 | 第61-62页 |
| 5.2.1 ELISA棋盘滴定试验 | 第61页 |
| 5.2.2 间接竞争性ELISA | 第61-62页 |
| 5.2.3 标准曲线绘制 | 第62页 |
| 5.2.4 加标回收试验 | 第62页 |
| 5.3 结果与分析 | 第62-65页 |
| 5.3.1 ELISA方正滴定结果 | 第62-63页 |
| 5.3.2 标准曲线绘制 | 第63-64页 |
| 5.3.3 加标回收试验 | 第64-65页 |
| 5.4 讨论与小结 | 第65-66页 |
| 5.4.1 讨论 | 第65页 |
| 5.4.2 小结 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第73页 |
| 个人简介 | 第73页 |
