| 摘要 | 第4-8页 |
| abstract | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第19-39页 |
| 1.1 干扰素的分类 | 第19页 |
| 1.2 Ⅲ型干扰素细胞因子家族特点 | 第19-22页 |
| 1.3 Ⅲ型干扰素的基因和蛋白质结构 | 第22-25页 |
| 1.4 Ⅲ型干扰素的细胞内来源 | 第25-28页 |
| 1.5 Ⅲ型干扰素受体 | 第28-30页 |
| 1.6 Ⅲ型干扰素的靶细胞 | 第30-32页 |
| 1.7 Ⅲ型干扰素的信号转导 | 第32页 |
| 1.8 Ⅲ型干扰素的生物学效应 | 第32-36页 |
| 1.9 Ⅲ型干扰素的应用前景 | 第36-37页 |
| 1.10 本论文的思路及方法 | 第37-38页 |
| 1.11 本文的创新点 | 第38-39页 |
| 第二章 Ⅲ型干扰素嵌合体的表达、纯化与修饰 | 第39-55页 |
| 2.1 实验材料、试剂与仪器 | 第39-43页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第39页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第39-41页 |
| 2.1.3 实验设备 | 第41-42页 |
| 2.1.4 主要试剂配方： | 第42-43页 |
| 2.2 实验方法 | 第43-46页 |
| 2.2.1 原核达载体构建 | 第43-44页 |
| 2.2.2 表达和纯化IFN-λ 嵌合体 | 第44-45页 |
| 2.2.3 PEG修饰和纯化 | 第45-46页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第46-51页 |
| 2.3.1 设计和筛选IFN-λ 嵌合体 | 第46-48页 |
| 2.3.2 纯化和分析嵌合体蛋白质 | 第48-51页 |
| 2.4 讨论 | 第51-53页 |
| 2.5 小结 | 第53-55页 |
| 第三章 Ⅲ型干扰素嵌合体的抗病毒活性研究 | 第55-82页 |
| 3.1 实验材料、试剂与仪器 | 第55-57页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第55页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第55-57页 |
| 3.1.3 实验设备 | 第57页 |
| 3.2 实验方法 | 第57-64页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第57页 |
| 3.2.2 实时荧光定量PCR实验 | 第57-59页 |
| 3.2.2.1 总RNA提取 | 第57-58页 |
| 3.2.2.2 c DNA合成实验操作步骤 | 第58-59页 |
| 3.2.2.3 实时荧光定量PCR | 第59页 |
| 3.2.3 表达荧光素酶报告基因细胞系的建立 | 第59-61页 |
| 3.2.3.1 实验原理 | 第59-60页 |
| 3.2.3.2 转染p GL4.45[luc2P/ISRE/Hygro]质粒 | 第60-61页 |
| 3.2.4 蛋白免疫印迹（Western blot）实验 | 第61-62页 |
| 3.2.4.1 细胞总蛋白提取 | 第61页 |
| 3.2.4.2 Western blot实验方法 | 第61-62页 |
| 3.2.5 免疫荧光 | 第62-63页 |
| 3.2.5.1 实验方法 | 第62-63页 |
| 3.2.5.2 丙肝病毒的制备 | 第63页 |
| 3.2.6 A型流感病毒（A/H3N2）的扩增 | 第63-64页 |
| 3.2.7 嵌合体干扰素抑制A型流感病毒（A/H3N2）的测定 | 第64页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第64-78页 |
| 3.3.1 嵌合体干扰素诱导Mx A和OAS的表达 | 第64-69页 |
| 3.3.2 PEG修饰的嵌合体干扰素诱导Mx A和OAS的表达 | 第69页 |
| 3.3.3 STAT1磷酸化的测定 | 第69-70页 |
| 3.3.4 荧光素酶报告基因测定干扰素活性 | 第70-73页 |
| 3.3.5 干扰素抗丙型肝炎病毒活性的测定 | 第73-77页 |
| 3.3.6 嵌合体抑制A型流感病毒的测定 | 第77-78页 |
| 3.3.7 PEG-analog-6 稳定性测试 | 第78页 |
| 3.4 讨论 | 第78-80页 |
| 3.5 小结 | 第80-82页 |
| 第四章 Ⅲ型干扰素嵌合体的抗肿瘤活性研究 | 第82-95页 |
| 4.1 实验材料、试剂与仪器 | 第82-83页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第82页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第82页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第82-83页 |
| 4.2 实验方法 | 第83-84页 |
| 4.2.1 嵌合体干扰素抑制细胞增殖的检测 | 第83页 |
| 4.2.1.1 实验原理 | 第83页 |
| 4.2.1.2 实验步骤 | 第83页 |
| 4.2.2 检测STAT1的活化 | 第83页 |
| 4.2.2.1 Western blot实验 | 第83页 |
| 4.2.3 荧光定量PCR实验 | 第83-84页 |
| 4.2.4 DAPI染色观察细胞凋亡情况 | 第84页 |
| 4.2.4.1 实验原理 | 第84页 |
| 4.3 实验结果 | 第84-91页 |
| 4.3.1 RT-PCR检测肿瘤细胞Ⅲ型干扰素受体的表达 | 第84页 |
| 4.3.2 嵌合体干扰素对肿瘤细胞增殖的抑制作用 | 第84-88页 |
| 4.3.3 嵌合体干扰素诱导HCC827细胞STAT1磷酸化 | 第88页 |
| 4.3.4 嵌合体干扰素诱导HCC827细胞凋亡 | 第88-89页 |
| 4.3.5 嵌合体干扰素诱导HCC827表达APOBEC3G | 第89-91页 |
| 4.4 讨论 | 第91-92页 |
| 4.5 小结 | 第92-95页 |
| 结论 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-114页 |
| 作者简介 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
