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影响E.coli FtsZ自身组装及其与MreB相互作用的重要氨基酸分析

摘要第4-7页
ABSTRACT第7-9页
缩略词表第12-14页
引言第14-16页
1 前言第16-18页
2 材料、实验试剂与仪器第18-28页
    2.1 材料与试剂第18-19页
    2.2 仪器第19-20页
    2.3 部分试剂配制第20-28页
3 实验方法第28-44页
    3.1 质粒的提取第28页
    3.2 细菌的冻存第28-29页
    3.3 重组质粒的构建第29-32页
    3.4 细菌基因组DNA的提取第32页
    3.5 普通感受态制备第32-33页
    3.6 电穿孔感受态制备第33-34页
    3.7 普通转化第34页
    3.8 电穿孔转化第34-35页
    3.9 细菌菌体沉淀回收第35页
    3.10 菌体细胞的裂解第35-36页
    3.11 SDS-PAGE凝胶电泳第36页
    3.12 WESTERN BLOT第36-37页
    3.13 透析袋的处理第37-38页
    3.14 蛋白纯化(1ml HP 柱子)第38-39页
    3.15 HP柱子再生第39页
    3.16 原核蛋白的诱导表达第39页
    3.17 OVERLAP PCR第39-41页
    3.18 活细胞成像技术第41页
    3.19 同源重组法构建菌株第41页
    3.20 免疫共沉淀第41-42页
    3.21 细胞双杂交试验第42页
    3.22 光扫描法第42页
    3.23 平板补偿实验第42页
    3.24 生长曲线分析第42-44页
4 实验结果第44-54页
    4.1 FTSZ突变体位点选择与设计第44页
    4.2 FTSZ及其突变体表达质粒的构建(详细构建信息见附录 1)第44-46页
        4.2.1 pQN1( P_(lac)-ftsZ )质粒的构建第44-45页
        4.2.2 FtsZ突变体表达质粒的构建[以pQN2(P_(lac)-fts~(E75A))为例]第45-46页
    4.3 同源重组构建QN6、QN7、QN8和QN9菌株(构建结果以QN6为例)第46-47页
        4.3.1 ftsZ::yfp-cat融合基因片段的制备第46页
        4.3.2 QN6(ftsZ::yfp-cat)菌株的构建第46-47页
    4.4 E75、R78和D82是影响FTSZ在E.COLI中形成Z环的重要氨基酸第47-48页
    4.5 补偿实验验证FTSZ突变体功能第48页
    4.6 E75、R78和D82是影响FTSZ自身组装的重要氨基酸第48-51页
        4.6.1 免疫共沉淀实验验证E75、R78和D82是影响FtsZ自身组装的重要氨基酸第48-49页
        4.6.2 构建带His标签的FtsZ及其突变体融合质粒并表达纯化第49-50页
        4.6.3 光扫描实验验证E75、R78和D82是影响FtsZ自身组装的重要氨基酸第50-51页
    4.7 E75、R78和D82位点氨基酸极性改变影响FTSZ-MREB相互作用第51-54页
        4.7.1 pUT18C-fts Z表达质粒的构建(XbaⅠ/BamHⅠ)第51-52页
        4.7.2 pKT25-mreB表达质粒的构建(XbaⅠ/EcoRⅠ)第52-53页
        4.7.3 E75、R78和D82位点氨基酸极性改变影响FtsZ-MreB相互作用第53-54页
讨论第54-56页
结论第56-58页
参考文献第58-60页
综述第60-72页
    参考文献第67-72页
附录第72-80页
致谢第80-82页
在读期间参加的学术会议及研究成果第82-83页

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