摘要 | 第4-7页 |
ABSTRACT | 第7-9页 |
缩略词表 | 第12-14页 |
引言 | 第14-16页 |
1 前言 | 第16-18页 |
2 材料、实验试剂与仪器 | 第18-28页 |
2.1 材料与试剂 | 第18-19页 |
2.2 仪器 | 第19-20页 |
2.3 部分试剂配制 | 第20-28页 |
3 实验方法 | 第28-44页 |
3.1 质粒的提取 | 第28页 |
3.2 细菌的冻存 | 第28-29页 |
3.3 重组质粒的构建 | 第29-32页 |
3.4 细菌基因组DNA的提取 | 第32页 |
3.5 普通感受态制备 | 第32-33页 |
3.6 电穿孔感受态制备 | 第33-34页 |
3.7 普通转化 | 第34页 |
3.8 电穿孔转化 | 第34-35页 |
3.9 细菌菌体沉淀回收 | 第35页 |
3.10 菌体细胞的裂解 | 第35-36页 |
3.11 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第36页 |
3.12 WESTERN BLOT | 第36-37页 |
3.13 透析袋的处理 | 第37-38页 |
3.14 蛋白纯化(1ml HP 柱子) | 第38-39页 |
3.15 HP柱子再生 | 第39页 |
3.16 原核蛋白的诱导表达 | 第39页 |
3.17 OVERLAP PCR | 第39-41页 |
3.18 活细胞成像技术 | 第41页 |
3.19 同源重组法构建菌株 | 第41页 |
3.20 免疫共沉淀 | 第41-42页 |
3.21 细胞双杂交试验 | 第42页 |
3.22 光扫描法 | 第42页 |
3.23 平板补偿实验 | 第42页 |
3.24 生长曲线分析 | 第42-44页 |
4 实验结果 | 第44-54页 |
4.1 FTSZ突变体位点选择与设计 | 第44页 |
4.2 FTSZ及其突变体表达质粒的构建(详细构建信息见附录 1) | 第44-46页 |
4.2.1 pQN1( P_(lac)-ftsZ )质粒的构建 | 第44-45页 |
4.2.2 FtsZ突变体表达质粒的构建[以pQN2(P_(lac)-fts~(E75A))为例] | 第45-46页 |
4.3 同源重组构建QN6、QN7、QN8和QN9菌株(构建结果以QN6为例) | 第46-47页 |
4.3.1 ftsZ::yfp-cat融合基因片段的制备 | 第46页 |
4.3.2 QN6(ftsZ::yfp-cat)菌株的构建 | 第46-47页 |
4.4 E75、R78和D82是影响FTSZ在E.COLI中形成Z环的重要氨基酸 | 第47-48页 |
4.5 补偿实验验证FTSZ突变体功能 | 第48页 |
4.6 E75、R78和D82是影响FTSZ自身组装的重要氨基酸 | 第48-51页 |
4.6.1 免疫共沉淀实验验证E75、R78和D82是影响FtsZ自身组装的重要氨基酸 | 第48-49页 |
4.6.2 构建带His标签的FtsZ及其突变体融合质粒并表达纯化 | 第49-50页 |
4.6.3 光扫描实验验证E75、R78和D82是影响FtsZ自身组装的重要氨基酸 | 第50-51页 |
4.7 E75、R78和D82位点氨基酸极性改变影响FTSZ-MREB相互作用 | 第51-54页 |
4.7.1 pUT18C-fts Z表达质粒的构建(XbaⅠ/BamHⅠ) | 第51-52页 |
4.7.2 pKT25-mreB表达质粒的构建(XbaⅠ/EcoRⅠ) | 第52-53页 |
4.7.3 E75、R78和D82位点氨基酸极性改变影响FtsZ-MreB相互作用 | 第53-54页 |
讨论 | 第54-56页 |
结论 | 第56-58页 |
参考文献 | 第58-60页 |
综述 | 第60-72页 |
参考文献 | 第67-72页 |
附录 | 第72-80页 |
致谢 | 第80-82页 |
在读期间参加的学术会议及研究成果 | 第82-83页 |