| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-17页 |
| 1.1 微生物油脂 | 第10页 |
| 1.1.1 微生物油脂 | 第10页 |
| 1.1.2 海洋微生物 | 第10页 |
| 1.2 脂肪酸 | 第10-12页 |
| 1.2.1 脂肪酸合成酶类型 | 第10-12页 |
| 1.2.2 脂肪酸的应用 | 第12页 |
| 1.3 酰基载体蛋白 | 第12-15页 |
| 1.3.1 酰基载体蛋白的发现 | 第12页 |
| 1.3.2 酰基载体蛋白的结构 | 第12-14页 |
| 1.3.3 酰基载体蛋白的作用机理 | 第14页 |
| 1.3.4 脂肪酸合成途径中酰基载体蛋白的研究 | 第14-15页 |
| 1.4 本课题的研究目的及意义 | 第15-16页 |
| 1.5 实验方案 | 第16-17页 |
| 第二章 产油微生物的筛选及鉴定 | 第17-25页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.1 材料 | 第17页 |
| 2.1.2 培养基 | 第17页 |
| 2.1.3 试剂及试剂盒 | 第17页 |
| 2.1.4 仪器及设备 | 第17-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-20页 |
| 2.2.1 菌株分离纯化 | 第18页 |
| 2.2.2 苏丹黑B染色筛选 | 第18页 |
| 2.2.3 生物量测定 | 第18页 |
| 2.2.4 酸热法提取油脂 | 第18-19页 |
| 2.2.5 生理生化鉴定 | 第19页 |
| 2.2.6 分子生物学鉴定 | 第19-20页 |
| 2.3 结果与分析 | 第20-25页 |
| 2.3.1 苏丹黑B染色结果 | 第20页 |
| 2.3.2 酸热法提取油脂结果 | 第20-21页 |
| 2.3.3 生理生化特征 | 第21-22页 |
| 2.3.4 基因组DNA提取结果 | 第22页 |
| 2.3.5 5.8S rDNA扩增结果 | 第22-23页 |
| 2.3.6 系统进化树分析 | 第23-25页 |
| 第三章 酸热法提取油脂条件优化 | 第25-32页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第25页 |
| 3.1.1 菌株 | 第25页 |
| 3.1.2 试剂 | 第25页 |
| 3.2 实验方法 | 第25-26页 |
| 3.2.1 酸热法提取油脂 | 第25页 |
| 3.2.2 单因素实验 | 第25页 |
| 3.2.3 正交试验 | 第25-26页 |
| 3.3 结果与分析 | 第26-32页 |
| 3.3.1 盐酸浓度对油脂得率的影响 | 第26页 |
| 3.3.2 盐酸体积对油脂得率的影响 | 第26-27页 |
| 3.3.3 酸热时间对油脂得率的影响 | 第27页 |
| 3.3.4 氯仿-甲醇配比对油脂得率的影响 | 第27-28页 |
| 3.3.5 萃取剂体积对油脂得率的影响 | 第28-29页 |
| 3.3.6 0.15% NaCl溶液体积对油脂得率的影响 | 第29页 |
| 3.3.7 正交试验 | 第29-31页 |
| 3.3.8 验证实验 | 第31-32页 |
| 第四章 酰基载体蛋白基因的克隆 | 第32-44页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第32-33页 |
| 4.1.1 菌株 | 第32页 |
| 4.1.2 培养基 | 第32页 |
| 4.1.3 试剂及试剂盒 | 第32-33页 |
| 4.2 实验方法 | 第33-38页 |
| 4.2.1 引物设计 | 第33页 |
| 4.2.2 mgACP基因的克隆 | 第33-34页 |
| 4.2.3 扩增产物回收 | 第34页 |
| 4.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2) | 第34-35页 |
| 4.2.5 连接及转化 | 第35页 |
| 4.2.6 重组质粒的提取 | 第35-36页 |
| 4.2.7 菌落PCR鉴定 | 第36-37页 |
| 4.2.8 重组质粒PCR鉴定 | 第37页 |
| 4.2.9 序列分析 | 第37-38页 |
| 4.3 结果与分析 | 第38-44页 |
| 4.3.1 目的基因的扩增结果 | 第38页 |
| 4.3.2 PCR扩增产物回收结果 | 第38-39页 |
| 4.3.3 菌落PCR鉴定结果 | 第39-40页 |
| 4.3.4 重组质粒提取结果 | 第40页 |
| 4.3.5 重组质粒PCR鉴定结果 | 第40-41页 |
| 4.3.6 系统进化树分析 | 第41-44页 |
| 第五章 mgACP基因的生物信息学分析 | 第44-50页 |
| 5.1 材料 | 第44页 |
| 5.1.1 在线网站 | 第44页 |
| 5.2 结果与分析 | 第44-50页 |
| 5.2.1 蛋白理化性质预测与分析 | 第44-46页 |
| 5.2.2 二级结构预测与分析 | 第46页 |
| 5.2.3 疏水性/亲水性预测与分析 | 第46-47页 |
| 5.2.4 信号肽预测与分析 | 第47-48页 |
| 5.2.5 磷酸化位点预测与分析 | 第48页 |
| 5.2.6 蛋白跨膜结构预测与分析 | 第48-49页 |
| 5.2.7 三级结构预测与分析 | 第49-50页 |
| 第六章 mgACP的原核表达与分析 | 第50-61页 |
| 6.1 材料与试剂 | 第50-51页 |
| 6.1.1 菌株 | 第50页 |
| 6.1.2 试剂 | 第50-51页 |
| 6.2 实验方法 | 第51-54页 |
| 6.2.1 表达载体的构建 | 第51-52页 |
| 6.2.2 感受态的制备 | 第52页 |
| 6.2.3 重组质粒转化 | 第52页 |
| 6.2.4 重组质粒提取 | 第52页 |
| 6.2.5 菌落PCR鉴定 | 第52页 |
| 6.2.6 重组质粒PCR鉴定 | 第52页 |
| 6.2.7 生长动力学试验 | 第52页 |
| 6.2.8 诱导表达目的蛋白 | 第52-53页 |
| 6.2.9 SDS-PAGE分析 | 第53-54页 |
| 6.3 结果与分析 | 第54-61页 |
| 6.3.1 双酶切结果 | 第54-55页 |
| 6.3.2 酶切产物回收结果 | 第55页 |
| 6.3.3 菌落PCR鉴定结果 | 第55-56页 |
| 6.3.4 重组质粒提取结果 | 第56-57页 |
| 6.3.5 重组质粒PCR鉴定结果 | 第57页 |
| 6.3.6 测序验证 | 第57-58页 |
| 6.3.7 生长动力学试验结果 | 第58-59页 |
| 6.3.8 SDS-PAGE分析结果 | 第59-61页 |
| 第七章 结果与讨论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67页 |