| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略词表(ABBREVIATION) | 第12-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-33页 |
| 1 鸡传染性法氏囊病的研究进展 | 第14-21页 |
| 1.1 IBDV的病原学 | 第15-17页 |
| 1.1.1 病毒学分类、形态及理化特性 | 第15页 |
| 1.1.2 病毒培养特性 | 第15页 |
| 1.1.3 病毒血清型 | 第15-16页 |
| 1.1.4 IBDV的基因组结构和编码的蛋白 | 第16-17页 |
| 1.2 IBD的流行病学 | 第17-18页 |
| 1.2.1 自然宿主 | 第17页 |
| 1.2.2 传播媒介 | 第17-18页 |
| 1.2.3 传染源和传播途径 | 第18页 |
| 1.2.4 近年该病的流行出现了新特点 | 第18页 |
| 1.3 IBD诊断方法研究进展 | 第18-21页 |
| 2 胶体金免疫层析技术研究进展 | 第21-31页 |
| 2.1 胶体金免疫层析技术的原理 | 第21-26页 |
| 2.1.1 胶体金的定义和特点 | 第21-22页 |
| 2.1.2 胶体金标记技术 | 第22页 |
| 2.1.3 免疫胶体金技术 | 第22-23页 |
| 2.1.4 免疫层析技术 | 第23页 |
| 2.1.5 胶体金免疫层析技术 | 第23-26页 |
| 2.1.5.1 抗体夹心法 | 第24页 |
| 2.1.5.2 间接法 | 第24-25页 |
| 2.1.5.3 竞争抑制法 | 第25-26页 |
| 2.2 胶体金免疫层析技术的优点 | 第26页 |
| 2.2.1 快捷迅速,大大缩短出结果时间 | 第26页 |
| 2.2.2 灵敏准确 | 第26页 |
| 2.2.3 结果受外界因素影响较小 | 第26页 |
| 2.2.4 安全简便,不需任何仪器和设备 | 第26页 |
| 2.2.5 成本低廉,所需试剂和样本量少 | 第26页 |
| 2.3 胶体金免疫层析试纸条的制备流程 | 第26-29页 |
| 2.3.1 胶体金的制备 | 第26-27页 |
| 2.3.2 金标抗体的制备、纯化及保存 | 第27-28页 |
| 2.3.3 胶体金免疫层析试纸条的结构及检测原理 | 第28-29页 |
| 2.4 胶体金免疫层析技术在兽医领域的应用 | 第29-30页 |
| 2.4.1 病毒性疾病的诊断 | 第29页 |
| 2.4.2 细菌性疾病的诊断 | 第29-30页 |
| 2.4.3 寄生虫病的诊断 | 第30页 |
| 2.4.4 血、尿残留药物浓度的检测 | 第30页 |
| 2.5 胶体金免疫层析技术的研究趋势 | 第30-31页 |
| 2.5.1 提高胶体金质量 | 第30-31页 |
| 2.5.2 进一步提高检测灵敏度,拓宽检测范围 | 第31页 |
| 2.5.3 实现多项检测 | 第31页 |
| 2.5.4 实现半定量或定量测定 | 第31页 |
| 3 研究目的与意义 | 第31-33页 |
| 第2章 IBDV的VP2基因的原核表达及表达蛋白的纯化和免疫活性鉴定 | 第33-40页 |
| 1 材料与方法 | 第33-38页 |
| 1.1 试验材料 | 第33-35页 |
| 1.1.1 质粒、细菌及主要试剂 | 第33页 |
| 1.1.2 主要试剂及溶液的配制 | 第33-35页 |
| 1.1.2.1 抗生素类 | 第33页 |
| 1.1.2.2 常用贮存液的配制 | 第33-34页 |
| 1.1.2.3 SDS-PAGE和Western-blot试剂 | 第34-35页 |
| 1.1.2.4 GST标签蛋白亲和层析纯化柱配方 | 第35页 |
| 1.2 方法 | 第35-38页 |
| 1.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| 1.2.2 重组表达质粒的转化 | 第36页 |
| 1.2.3 诱导表达 | 第36页 |
| 1.2.4 蛋白浓度的测定 | 第36-37页 |
| 1.2.5 SDS-PAGE电泳 | 第37页 |
| 1.2.6 Western-blot | 第37-38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-39页 |
| 2.1 重组菌诱导表达及目标蛋白纯化的SDS-PAGE电泳结果 | 第38页 |
| 2.2 Western-blot分析 | 第38-39页 |
| 2.3 蛋白浓度的测定 | 第39页 |
| 3 讨论 | 第39页 |
| 3.1 表达载体和表达菌的选择 | 第39页 |
| 3.2 诱导表达条件的选择 | 第39页 |
| 3.3 对VP2蛋白表达量低的分析 | 第39页 |
| 4 结论 | 第39-40页 |
| 第3章 鸡传染性法氏囊血清抗体胶体金免疫层析方法的建立 | 第40-56页 |
| 1 材料与方法 | 第40-46页 |
| 1.1 材料 | 第40-41页 |
| 1.1.1 仪器和材料 | 第40页 |
| 1.1.2 抗体、血清、抗原及化学试剂 | 第40页 |
| 1.1.3 溶液的配制 | 第40-41页 |
| 1.2 方法 | 第41-46页 |
| 1.2.1 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的制备与纯化 | 第41页 |
| 1.2.1.1 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的制备 | 第41页 |
| 1.2.1.2 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的纯化 | 第41页 |
| 1.2.2 胶体金的制备 | 第41-42页 |
| 1.2.3 胶体金颗粒的鉴定 | 第42页 |
| 1.2.4 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的最适标记胶体金pH值 | 第42页 |
| 1.2.5 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的最适标记量的确定 | 第42-43页 |
| 1.2.6 金标单抗复合物的制备与纯化 | 第43页 |
| 1.2.7 封闭液的选择 | 第43-44页 |
| 1.2.8 样品垫、金标垫的制备 | 第44页 |
| 1.2.9 点样 | 第44页 |
| 1.2.10 试纸条的组装及结果判定标准 | 第44-45页 |
| 1.2.11 试纸条特异性试验 | 第45页 |
| 1.2.12 试纸条敏感性试验 | 第45页 |
| 1.2.13 快速检测鸡传染性法氏囊血清抗体试剂盒组装及初步应用 | 第45-46页 |
| 1.2.13.1 快速检测鸡传染性法氏囊血清抗体诊断试剂盒的组成 | 第45-46页 |
| 1.2.13.2 快速检测鸡传染性法氏囊病血清抗体诊断试剂盒性能考察 | 第46页 |
| 1.2.13.3 快速检测鸡传染性法氏囊病血清抗体诊断试剂盒的初步应用 | 第46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-52页 |
| 2.1 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的纯化 | 第46-47页 |
| 2.2 胶体金的制备 | 第47-48页 |
| 2.3 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的最适标记胶体金pH值 | 第48页 |
| 2.4 抗鸡IgG Fc段单克隆抗体的最适标记量的确定 | 第48-49页 |
| 2.5 封闭液的选择 | 第49页 |
| 2.6 检测线和质控线包被物浓度的选择 | 第49页 |
| 2.7 试纸条特异性试验 | 第49-50页 |
| 2.8 试纸条敏感性试验 | 第50页 |
| 2.9 试剂盒的重复性试验和保存期试验 | 第50-51页 |
| 2.10 试剂盒的临床应用 | 第51-52页 |
| 3 讨论与结论 | 第52-55页 |
| 3.1 胶体金颗粒制备及鉴定 | 第52-53页 |
| 3.2 胶体金标记的单克隆抗体的制备 | 第53-54页 |
| 3.3 胶体金标记物抗鸡IgG Fc段单克隆抗体 | 第54页 |
| 3.4 封闭液的选择 | 第54页 |
| 3.5 点样量的确定 | 第54-55页 |
| 3.6 血清样品稀释倍数的确定 | 第55页 |
| 3.7 血清样品对试纸条敏感度的影响 | 第55页 |
| 3.8 快速检测鸡传染性法氏囊血清抗体诊断试剂盒的应用 | 第55页 |
| 4 结论 | 第55-56页 |
| 总结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
