| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-25页 |
| 1.1 前言 | 第11-12页 |
| 1.2 棘白菌素类药物 | 第12-15页 |
| 1.2.1 棘白菌素类药物简介 | 第12页 |
| 1.2.2 棘白菌素类药物的分类 | 第12-15页 |
| 1.3 阿尼芬净的研究进展 | 第15-18页 |
| 1.3.1 阿尼芬净简介 | 第15页 |
| 1.3.2 阿尼芬净的抗菌活性 | 第15-16页 |
| 1.3.3 阿尼芬净的制备方法 | 第16-18页 |
| 1.4 ECB脱酰基酶研究进展 | 第18-22页 |
| 1.4.1 ECB脱酰基酶简介 | 第18页 |
| 1.4.2 ECB脱酰基酶与阿库来菌素A脱酰基酶的比较 | 第18-19页 |
| 1.4.3 ECB脱酰基酶与青霉素酰化酶的比较 | 第19页 |
| 1.4.4 ECB脱酰基酶的功能与应用 | 第19-21页 |
| 1.4.5 ECB脱酰基酶重组表达的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.4.6 ECB脱酰基酶催化反应研究进展 | 第22页 |
| 1.5 本课题的立题背景、意义与主要研究内容 | 第22-25页 |
| 1.5.1 立题背景与意义 | 第22-23页 |
| 1.5.2 本文主要研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 ECB脱酰基酶基因的克隆与表达 | 第25-41页 |
| 2.1 引言 | 第25-26页 |
| 2.2 材料与方法 | 第26-35页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第26页 |
| 2.2.2 仪器与设备 | 第26-27页 |
| 2.2.3 主要药品与试剂 | 第27页 |
| 2.2.4 培养基 | 第27-28页 |
| 2.2.5 菌种的培养与保藏 | 第28-29页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.7 表达质粒pSET152-ecbD的构建 | 第30-32页 |
| 2.2.8 大肠杆菌质粒转化 | 第32-33页 |
| 2.2.9 大肠杆菌-链霉菌接合转移 | 第33页 |
| 2.2.10 重组S. coelicolor A3/pSET152-ecb D的筛选 | 第33页 |
| 2.2.11 重组子的验证 | 第33-34页 |
| 2.2.12 ECB脱酰基酶在Streptomyces coelicolor A3中表达 | 第34页 |
| 2.2.13 ECB脱酰基酶酶活测定 | 第34页 |
| 2.2.14 ECB母核的HPLC分析检测方法 | 第34-35页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第35-38页 |
| 2.3.1 重组质粒p SET152-ecbD的构建 | 第35-36页 |
| 2.3.2 重组S. coelicolor A3/pSET152-ecbD的构建 | 第36页 |
| 2.3.3 重组天蓝色链霉菌转化子复筛 | 第36-37页 |
| 2.3.4 转化子PCR验证 | 第37页 |
| 2.3.5 脱酰基酶基因在天蓝色链霉菌中的表达 | 第37-38页 |
| 2.4 本章小结 | 第38-41页 |
| 第三章 重组S. coelicolor A3/pSET152-ecbD培养条件优化 | 第41-55页 |
| 3.1 引言 | 第41-42页 |
| 3.2 材料与方法 | 第42-45页 |
| 3.2.1 出发菌株 | 第42页 |
| 3.2.2 仪器与设备 | 第42页 |
| 3.2.3 主要药品与试剂 | 第42页 |
| 3.2.4 菌种培养与保藏 | 第42-43页 |
| 3.2.5 分析方法 | 第43页 |
| 3.2.6 斜面培养时间的优化 | 第43页 |
| 3.2.7 种龄的优化 | 第43页 |
| 3.2.8 种子培养温度的优化 | 第43-44页 |
| 3.2.9 重组S. coelicolor A3/pSET152-ecbD发酵培养基的筛选 | 第44页 |
| 3.2.10 发酵培养基各成分的优化 | 第44页 |
| 3.2.11 发酵培基pH的优化 | 第44-45页 |
| 3.2.12 发酵培养温度的优化 | 第45页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第45-52页 |
| 3.3.1 斜面培养时间的优化 | 第45-46页 |
| 3.3.2 种龄的优化 | 第46-47页 |
| 3.3.3 种子培养温度优化 | 第47-48页 |
| 3.3.4 重组S. coelicolor A3/pSET152-ecb D发酵培养基的筛选 | 第48-49页 |
| 3.3.5 发酵培养基各成分的优化 | 第49-51页 |
| 3.3.6 发酵培基p H的优化 | 第51页 |
| 3.3.7 发酵培养温度的优化 | 第51-52页 |
| 3.4 本章小结 | 第52-55页 |
| 第四章 ECB脱酰基酶转化条件研究 | 第55-65页 |
| 4.1 引言 | 第55页 |
| 4.2 材料与方法 | 第55-59页 |
| 4.2.1 菌种 | 第55-56页 |
| 4.2.2 仪器与设备 | 第56页 |
| 4.2.3 主要药品和试剂 | 第56页 |
| 4.2.4 培养基 | 第56-57页 |
| 4.2.5 菌种保藏与培养 | 第57页 |
| 4.2.6 酶活测定 | 第57页 |
| 4.2.7 蛋白浓度测定 | 第57页 |
| 4.2.8 最适温度及温度稳定性 | 第57-58页 |
| 4.2.9 最适pH及pH稳定性 | 第58页 |
| 4.2.10 金属离子对反应的影响 | 第58页 |
| 4.2.11 底物浓度对反应的影响 | 第58页 |
| 4.2.12 ECB脱酰基酶反应进程分析 | 第58-59页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第59-64页 |
| 4.3.1 温度对酶活力的影响 | 第59-60页 |
| 4.3.2 pH对酶活力的影响 | 第60-62页 |
| 4.3.3 金属离子对酶活力的影响 | 第62-63页 |
| 4.3.4 底物浓度的影响 | 第63页 |
| 4.3.5 ECB脱酰基酶催化反应进程 | 第63-64页 |
| 4.4 本章小结 | 第64-65页 |
| 第五章 结论与展望 | 第65-67页 |
| 5.1 结论 | 第65页 |
| 5.2 展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 附录 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第76页 |
