| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语词汇表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-19页 |
| 1 转基因大豆生产现状 | 第13-15页 |
| 2 转基因产品检测技术 | 第15-16页 |
| 3 转基因作物外源蛋白及基因的研究现状 | 第16-18页 |
| 4 本研究的目的和内容 | 第18-19页 |
| 第二章 Cp4-epsps基因的原核表达及纯化 | 第19-33页 |
| 引言 | 第19页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第19-20页 |
| ·实验材料 | 第19页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·仪器及设备 | 第20页 |
| 2 实验方法 | 第20-27页 |
| ·引物设计 | 第20-21页 |
| ·抗体合成 | 第21-22页 |
| ·样品蛋白质提取 | 第22页 |
| ·样品总DNA提取 | 第22页 |
| ·PCR扩增 | 第22-23页 |
| ·DNA片段的凝胶回收 | 第23-24页 |
| ·重组子的构建 | 第24页 |
| ·重组子转化大肠杆菌感受态 | 第24页 |
| ·大肠杆菌中质粒DNA的小量提取—碱裂解法 | 第24-25页 |
| ·重组子的筛选和鉴定 | 第25页 |
| ·测序及比对 | 第25页 |
| ·外源基因全长克隆及原核表达,纯化 | 第25-26页 |
| ·Western blot分析 | 第26-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-31页 |
| ·转基因RR大豆粉中Cp4-epsps基因的克隆与原核表达 | 第27-29页 |
| ·转基因RR大豆粉中DNA提取及Cp4-epsps基因PCR扩增 | 第27页 |
| ·pMD 19T-Cp4-epsps克隆载体的构建、筛选与酶切验证 | 第27-28页 |
| ·pET 32a-Cp4-epsps原核表达载体的构建、筛选与酶切验证 | 第28-29页 |
| ·Cp4-epsps基因的诱导表达 | 第29页 |
| ·CP4-EPSPS蛋白多克隆抗体的特异性验证 | 第29-31页 |
| 4 小结 | 第31-33页 |
| 第三章 转基因Roundup Ready大豆加工过程中外源CP4-EPSPS蛋白及基因的降解变化规律 | 第33-45页 |
| 引言 | 第33页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第33-34页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·仪器及设备 | 第34页 |
| 2 实验方法 | 第34-39页 |
| ·商品化大豆食品制品中内外源基因的检测 | 第34页 |
| ·转基因RR大豆制备成食品的加工过程中分步取样 | 第34页 |
| ·样品蛋白质提取 | 第34页 |
| ·样品DNA提取 | 第34页 |
| ·PCR扩增 | 第34-38页 |
| ·PCR扩增反应所用引物 | 第34-37页 |
| ·PCR扩增反应程序 | 第37-38页 |
| ·测序及比对 | 第38页 |
| ·Western blot分析 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-44页 |
| ·商品化大豆产品中内源lectin基因的降解变化 | 第39页 |
| ·商品化大豆产品中外源Cp4-epsps基因的检测及其降解变化 | 第39-41页 |
| ·转基因RR大豆加工过程中外源CP4-EPSPS蛋白的降解变化 | 第41-42页 |
| ·转基因RR大豆加工过程中Cp4-epsps基因的降解变化 | 第42-44页 |
| 4 小结 | 第44-45页 |
| 第四章 加工条件处理下转基因Roundup Ready大豆外源CP4-EPSPS蛋白及基因的降解变化规律 | 第45-59页 |
| 引言 | 第45页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第45-46页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45-46页 |
| ·仪器及设备 | 第46页 |
| 2 实验方法 | 第46-47页 |
| ·不同加工因素对转基因RR大豆粉的处理 | 第46页 |
| ·高温处理 | 第46页 |
| ·微波处理 | 第46页 |
| ·高温高压处理 | 第46页 |
| ·样品蛋白质提取 | 第46页 |
| ·样品DNA提取 | 第46页 |
| ·PCR扩增 | 第46-47页 |
| ·测序及比对 | 第47页 |
| ·Western blot分析 | 第47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-57页 |
| ·高温处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白及基因的降解变化规律的影响 | 第47-50页 |
| ·高温处理下转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白的降解变化 | 第48-49页 |
| ·高温处理下转基因RR大豆粉中基因的降解变化 | 第49-50页 |
| ·微波处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白及基因的降解变化规律的影响 | 第50-53页 |
| ·微波处理下转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白的降解变化 | 第50-51页 |
| ·微波处理下转基因RR大豆粉中基因的降解变化 | 第51-53页 |
| ·高温高压处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白及基因的降解变化规律的影响 | 第53-57页 |
| ·高温高压处理下转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白的降解变化 | 第53-55页 |
| ·高温高压处理下RR大豆粉中基因的降解变化 | 第55-57页 |
| 4 小结 | 第57-59页 |
| 第五章 水解酶处理下转基因Roundup Ready大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白及基因的降解变化规律 | 第59-79页 |
| 引言 | 第59页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第59-60页 |
| ·实验材料 | 第59页 |
| ·主要试剂 | 第59-60页 |
| ·仪器及设备 | 第60页 |
| 2 实验方法 | 第60-63页 |
| ·不同酶对转基因RR大豆粉的处理 | 第60-61页 |
| ·木瓜蛋白酶处理 | 第60页 |
| ·胃蛋白酶处理 | 第60页 |
| ·胰蛋白酶处理 | 第60-61页 |
| ·胰酶处理 | 第61页 |
| ·RNase A处理 | 第61页 |
| ·样品蛋白质提取 | 第61页 |
| ·样品DNA提取 | 第61-62页 |
| ·PCR扩增 | 第62页 |
| ·测序及比对 | 第62页 |
| ·Western blot分析 | 第62-63页 |
| 3 结果与分析 | 第63-77页 |
| ·木瓜蛋白酶处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白及基因的影响 | 第63-67页 |
| ·木瓜蛋白酶处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白的影响 | 第63-65页 |
| ·木瓜蛋白酶处理对转基因RR大豆粉中基因的影响 | 第65-67页 |
| ·胃蛋白酶处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白及基因的影响 | 第67-70页 |
| ·胃蛋白酶处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白的影响 | 第68页 |
| ·胃蛋白酶处理对转基因RR大豆粉中基因的影响 | 第68-70页 |
| ·胰蛋白酶处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白及基因的影响 | 第70-72页 |
| ·胰蛋白酶处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白的影响 | 第70-71页 |
| ·胰蛋白酶处理对转基因RR大豆粉中基因的影响 | 第71-72页 |
| ·胰酶处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白及基因的影响 | 第72-74页 |
| ·胰酶处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白的影响 | 第72-74页 |
| ·胰酶处理对转基因RR大豆粉中基因的影响 | 第74页 |
| ·核糖核酸酶A处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白及基因的影响 | 第74-77页 |
| ·核糖核酸酶A处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白的影响 | 第75页 |
| ·核糖核酸酶A处理对转基因RR大豆粉中基因的影响 | 第75-77页 |
| 4 小结 | 第77-79页 |
| 全文小结 | 第79-81页 |
| 讨论 | 第81-87页 |
| 参考文献 | 第87-91页 |
| 研究生期间发表的论文 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
