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转基因Roundup Ready大豆外源CP4-EPSPS蛋白及内外源基因在食品加工过程中的降解变化规律

摘要第1-10页
ABSTRACT第10-12页
缩略语词汇表第12-13页
第一章 文献综述第13-19页
 1 转基因大豆生产现状第13-15页
 2 转基因产品检测技术第15-16页
 3 转基因作物外源蛋白及基因的研究现状第16-18页
 4 本研究的目的和内容第18-19页
第二章 Cp4-epsps基因的原核表达及纯化第19-33页
 引言第19页
 1 材料、试剂与仪器第19-20页
   ·实验材料第19页
   ·菌株和质粒载体第19页
   ·主要试剂第19-20页
   ·仪器及设备第20页
 2 实验方法第20-27页
   ·引物设计第20-21页
   ·抗体合成第21-22页
   ·样品蛋白质提取第22页
   ·样品总DNA提取第22页
   ·PCR扩增第22-23页
   ·DNA片段的凝胶回收第23-24页
   ·重组子的构建第24页
   ·重组子转化大肠杆菌感受态第24页
   ·大肠杆菌中质粒DNA的小量提取—碱裂解法第24-25页
   ·重组子的筛选和鉴定第25页
   ·测序及比对第25页
   ·外源基因全长克隆及原核表达,纯化第25-26页
   ·Western blot分析第26-27页
 3 结果与分析第27-31页
   ·转基因RR大豆粉中Cp4-epsps基因的克隆与原核表达第27-29页
     ·转基因RR大豆粉中DNA提取及Cp4-epsps基因PCR扩增第27页
     ·pMD 19T-Cp4-epsps克隆载体的构建、筛选与酶切验证第27-28页
     ·pET 32a-Cp4-epsps原核表达载体的构建、筛选与酶切验证第28-29页
     ·Cp4-epsps基因的诱导表达第29页
   ·CP4-EPSPS蛋白多克隆抗体的特异性验证第29-31页
 4 小结第31-33页
第三章 转基因Roundup Ready大豆加工过程中外源CP4-EPSPS蛋白及基因的降解变化规律第33-45页
 引言第33页
 1 材料、试剂与仪器第33-34页
   ·实验材料第33页
   ·主要试剂第33-34页
   ·仪器及设备第34页
 2 实验方法第34-39页
   ·商品化大豆食品制品中内外源基因的检测第34页
   ·转基因RR大豆制备成食品的加工过程中分步取样第34页
   ·样品蛋白质提取第34页
   ·样品DNA提取第34页
   ·PCR扩增第34-38页
     ·PCR扩增反应所用引物第34-37页
     ·PCR扩增反应程序第37-38页
   ·测序及比对第38页
   ·Western blot分析第38-39页
 3 结果与分析第39-44页
   ·商品化大豆产品中内源lectin基因的降解变化第39页
   ·商品化大豆产品中外源Cp4-epsps基因的检测及其降解变化第39-41页
   ·转基因RR大豆加工过程中外源CP4-EPSPS蛋白的降解变化第41-42页
   ·转基因RR大豆加工过程中Cp4-epsps基因的降解变化第42-44页
 4 小结第44-45页
第四章 加工条件处理下转基因Roundup Ready大豆外源CP4-EPSPS蛋白及基因的降解变化规律第45-59页
 引言第45页
 1 材料、试剂与仪器第45-46页
   ·实验材料第45页
   ·主要试剂第45-46页
   ·仪器及设备第46页
 2 实验方法第46-47页
   ·不同加工因素对转基因RR大豆粉的处理第46页
     ·高温处理第46页
     ·微波处理第46页
     ·高温高压处理第46页
   ·样品蛋白质提取第46页
   ·样品DNA提取第46页
   ·PCR扩增第46-47页
   ·测序及比对第47页
   ·Western blot分析第47页
 3 结果与分析第47-57页
   ·高温处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白及基因的降解变化规律的影响第47-50页
     ·高温处理下转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白的降解变化第48-49页
     ·高温处理下转基因RR大豆粉中基因的降解变化第49-50页
   ·微波处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白及基因的降解变化规律的影响第50-53页
     ·微波处理下转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白的降解变化第50-51页
     ·微波处理下转基因RR大豆粉中基因的降解变化第51-53页
   ·高温高压处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白及基因的降解变化规律的影响第53-57页
     ·高温高压处理下转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白的降解变化第53-55页
     ·高温高压处理下RR大豆粉中基因的降解变化第55-57页
 4 小结第57-59页
第五章 水解酶处理下转基因Roundup Ready大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白及基因的降解变化规律第59-79页
 引言第59页
 1 材料、试剂与仪器第59-60页
   ·实验材料第59页
   ·主要试剂第59-60页
   ·仪器及设备第60页
 2 实验方法第60-63页
   ·不同酶对转基因RR大豆粉的处理第60-61页
     ·木瓜蛋白酶处理第60页
     ·胃蛋白酶处理第60页
     ·胰蛋白酶处理第60-61页
     ·胰酶处理第61页
     ·RNase A处理第61页
   ·样品蛋白质提取第61页
   ·样品DNA提取第61-62页
   ·PCR扩增第62页
   ·测序及比对第62页
   ·Western blot分析第62-63页
 3 结果与分析第63-77页
   ·木瓜蛋白酶处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白及基因的影响第63-67页
     ·木瓜蛋白酶处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白的影响第63-65页
     ·木瓜蛋白酶处理对转基因RR大豆粉中基因的影响第65-67页
   ·胃蛋白酶处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白及基因的影响第67-70页
     ·胃蛋白酶处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白的影响第68页
     ·胃蛋白酶处理对转基因RR大豆粉中基因的影响第68-70页
   ·胰蛋白酶处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白及基因的影响第70-72页
     ·胰蛋白酶处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白的影响第70-71页
     ·胰蛋白酶处理对转基因RR大豆粉中基因的影响第71-72页
   ·胰酶处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白及基因的影响第72-74页
     ·胰酶处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白的影响第72-74页
     ·胰酶处理对转基因RR大豆粉中基因的影响第74页
   ·核糖核酸酶A处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白及基因的影响第74-77页
     ·核糖核酸酶A处理对转基因RR大豆粉中外源CP4-EPSPS蛋白的影响第75页
     ·核糖核酸酶A处理对转基因RR大豆粉中基因的影响第75-77页
 4 小结第77-79页
全文小结第79-81页
讨论第81-87页
参考文献第87-91页
研究生期间发表的论文第91-93页
致谢第93页

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