| 摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 缩略语 | 第16-19页 |
| 1 前言 | 第19-27页 |
| 1.1 立题依据 | 第19-20页 |
| 1.2 喹赛多促生长作用的研究进展 | 第20-22页 |
| 1.2.1 喹赛多促生长效果 | 第20-21页 |
| 1.2.2 喹赛多可能的促生长作用机制 | 第21-22页 |
| 1.3 表观遗传学主要内容 | 第22-23页 |
| 1.4 表观遗传学与机体生长发育的关系 | 第23-25页 |
| 1.5 研究内容和目标 | 第25-27页 |
| 2 材料方法 | 第27-53页 |
| 2.1 细胞株 | 第27页 |
| 2.2 主要试剂 | 第27-29页 |
| 2.3 主要仪器 | 第29-31页 |
| 2.4 主要试剂的配制 | 第31-33页 |
| 2.5 细胞培养及冻存 | 第33-34页 |
| 2.6 MTT法筛选喹赛多作用下有利于BRL细胞生长的条件 | 第34-35页 |
| 2.6.1 MTT法检测喹赛多对BRL细胞生长状况的影响 | 第34页 |
| 2.6.2 MTT法检测对照药rGH对BRL细胞生长状况的影响 | 第34-35页 |
| 2.7 喹赛多对细胞内与生长相关基因、DNA甲基化相关基因和组蛋白修饰相关基因mRNA表达的影响 | 第35-39页 |
| 2.7.1 细胞处理 | 第35页 |
| 2.7.2 细胞总RNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.7.4 总RNA的纯度及完整性检测 | 第36页 |
| 2.7.5 反转录合成cDNA | 第36-37页 |
| 2.7.6 实时荧光定量PCR检测目的基因mRNA表达水平 | 第37-39页 |
| 2.8 喹赛多对DNA甲基化的影响 | 第39-43页 |
| 2.8.1 喹赛多对基因组DNA甲基化的影响 | 第39-41页 |
| 2.8.2 喹赛多对基因IGF-1 启动子区域DNA甲基化的影响 | 第41-43页 |
| 2.9 Western blot检测喹赛多对细胞中总体组蛋白修饰(H3K27ac和H3K4me3)的影响 | 第43-47页 |
| 2.9.1 细胞蛋白提取 | 第43页 |
| 2.9.2 蛋白浓度测定 | 第43-44页 |
| 2.9.3 SDS-PAGE电泳 | 第44-46页 |
| 2.9.4 转膜 | 第46页 |
| 2.9.5 免疫反应 | 第46-47页 |
| 2.9.6 化学发光、定影 | 第47页 |
| 2.10 ChIP-qPCR检测喹赛多对基因IGF-1启动子区域组蛋白修饰(H3K27ac和H3K4me3)的影响 | 第47-51页 |
| 2.10.1 细胞的处理 | 第47页 |
| 2.10.2 细胞交联和样品制备 | 第47-48页 |
| 2.10.3 细胞核处理和染色质剪切 | 第48-49页 |
| 2.10.4 染色质的浓度分析及酶切 | 第49页 |
| 2.10.5 染色质免疫共沉淀 | 第49-50页 |
| 2.10.6 将染色质从抗体/蛋白G微珠上洗脱并解交联 | 第50页 |
| 2.10.7 离心柱纯化DNA | 第50-51页 |
| 2.11 用激光共聚焦显微镜观察喹赛多对染色质结构的影响 | 第51-52页 |
| 2.11.1 细胞爬片的制作及喹赛多对细胞的处理 | 第51页 |
| 2.11.2 免疫荧光实验观察喹赛多对染色质结构的影响 | 第51-52页 |
| 2.12 数据分析 | 第52-53页 |
| 3 结果 | 第53-88页 |
| 3.1 BRL细胞生长形态 | 第53-54页 |
| 3.2 MTT实验筛选喹赛多作用下有利于细胞生长的条件 | 第54-56页 |
| 3.3 细胞总RNA浓度及完整性检验结果 | 第56-57页 |
| 3.4 引物可靠性验证结果 | 第57-59页 |
| 3.4.1 熔解曲线和扩增曲线结果 | 第57页 |
| 3.4.2 部分基因PCR产物验证结果 | 第57-59页 |
| 3.5 喹赛多对BRL细胞中生长相关的基因mRNA表达变化的影响 | 第59-61页 |
| 3.6 喹赛多与BRL细胞作用后提取基因组DNA | 第61-62页 |
| 3.7 喹赛多作用下基因组DNA甲基化情况 | 第62-65页 |
| 3.8 喹赛多作用下IGF-1启动子区域DNA甲基化情况 | 第65-67页 |
| 3.9 喹赛多作用下细胞内与DNA甲基化相关基因mRNA的表达变化情况 | 第67-69页 |
| 3.10 喹赛多作用下对组蛋白修饰的影响 | 第69-71页 |
| 3.10.1 BCA工作曲线用于测定蛋白浓度 | 第69页 |
| 3.10.2 喹赛多对细胞中组蛋白H3K27ac的影响 | 第69-70页 |
| 3.10.3 喹赛多对细胞中组蛋白H3K4me3的影响 | 第70-71页 |
| 3.11 喹赛多对基因IGF-1启动子区域组蛋白修饰(H3K27ac和H3K4me3)的影响 | 第71-78页 |
| 3.11.1 ChIP实验中染色质酶切效果 | 第71-72页 |
| 3.11.2 ChIP实验验证实验的可靠性 | 第72-73页 |
| 3.11.3 喹赛多对IGF-1启动子区域组蛋白H3K4me3的影响 | 第73-75页 |
| 3.11.4 喹赛多对IGF-1启动子区域组蛋白H3K27ac的影响 | 第75-78页 |
| 3.12 药物作用下对细胞内组蛋白修饰相关基因mRNA表达变化的影响 | 第78-82页 |
| 3.12.1 喹赛多作用于BRL细胞后组蛋白甲基化相关基因mRNA表达变化情况 | 第78-80页 |
| 3.12.2 喹赛多作用于BRL细胞后组蛋白乙酰化相关基因mRNA表达变化情况 | 第80-82页 |
| 3.13 喹赛多对细胞内染色质结构的影响 | 第82-88页 |
| 4 讨论 | 第88-94页 |
| 4.1 喹赛多作用下有利于BRL细胞生长的条件 | 第88-89页 |
| 4.2 喹赛多可以影响细胞中DNA甲基化水平促进生长 | 第89-91页 |
| 4.3 喹赛多可以影响细胞内的组蛋白修饰水平促进生长 | 第91-93页 |
| 4.4 喹赛多可以影响染色质的结构有利于基因的表达 | 第93-94页 |
| 5 全文总结 | 第94-97页 |
| 6 文献综述：表观遗传学及其研究方法 | 第97-107页 |
| 6.1 前言 | 第97-98页 |
| 6.2 DNA甲基化及其研究方法 | 第98-102页 |
| 6.2.1 DNA甲基化 | 第98-99页 |
| 6.2.2 DNA甲基化研究方法 | 第99-102页 |
| 6.3 组蛋白修饰及其研究方法 | 第102-104页 |
| 6.3.1 组蛋白修饰 | 第102-103页 |
| 6.3.2 组蛋白修饰的研究方法 | 第103-104页 |
| 6.4 非编码RNA及其检测技术 | 第104-105页 |
| 6.4.1 非编码RNA | 第104页 |
| 6.4.2 非编码RNA检测技术 | 第104-105页 |
| 6.5 结语 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 附录 | 第120-143页 |
| Ⅰ 个人简介 | 第120-121页 |
| Ⅱ 实验的操作规程 | 第121-128页 |
| Ш 大鼠的IGF-1启动子区域序列及用Meth Primer 2.0设计的用于BSP法的DNA甲基化引物 | 第128-135页 |
| Ⅳ 实时荧光定量PCR各基因扩增曲线分析结果 | 第135-141页 |
| Ⅴ 答辩主要问题的问答与论文修改 | 第141-143页 |
