| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第10-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-28页 |
| 1.1 手性羟基酸简介 | 第14-22页 |
| 1.1.1 重要手性羟基酸及其应用 | 第14-16页 |
| 1.1.2 手性羟基酸的制备 | 第16-22页 |
| 1.2 酯水解酶 | 第22-26页 |
| 1.2.1 酯水解酶简介 | 第22-23页 |
| 1.2.2 酯水解酶的催化机理 | 第23页 |
| 1.2.3 酯水解酶在手性化合物制备中的应用 | 第23-26页 |
| 1.3 本课题的研究目的和意义 | 第26-27页 |
| 1.4 本课题的研究思路及内容 | 第27-28页 |
| 第2章 假单胞菌酯酶的克隆表达及其催化性能研究 | 第28-50页 |
| 2.1 前言 | 第28-29页 |
| 2.2 材料与方法 | 第29-39页 |
| 2.2.1 主要试剂和设备 | 第29-30页 |
| 2.2.2 P.putida ECU1011酯水解酶的基因挖掘 | 第30-31页 |
| 2.2.3 P.putida ECU1011酯水解酶基因的克隆 | 第31-33页 |
| 2.2.4 P.putida ECU1011酯水解酶基因的表达 | 第33页 |
| 2.2.5 P.putida ECU1011酯水解酶的筛选 | 第33页 |
| 2.2.6 酶活力及选择性的测定方法 | 第33-34页 |
| 2.2.7 假单胞菌酯酶rPPE01蛋白的纯化 | 第34页 |
| 2.2.8 恶臭假单胞菌酯酶rPPE01的性质表征 | 第34-35页 |
| 2.2.9 底物浓度对rPPE01活性和稳定性的影响 | 第35页 |
| 2.2.10 恶臭假单胞菌酯酶rPPE01的底物谱研究 | 第35-39页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第39-48页 |
| 2.3.1 P.putida ECU1011酯水解酶的筛选 | 第39页 |
| 2.3.2 rPPE01的序列及结构分析 | 第39-40页 |
| 2.3.3 rPPE01的表达优化 | 第40-41页 |
| 2.3.4 rPPE01的蛋白纯化 | 第41-42页 |
| 2.3.5 rPPE01的基本催化性质表征 | 第42-46页 |
| 2.3.6 底物浓度对rPPE01水解反应的影响 | 第46页 |
| 2.3.7 rPPE01底物谱研究 | 第46-48页 |
| 2.3.8 rPPE01与其他酯水解酶的比较 | 第48页 |
| 2.4 本章小结 | 第48-50页 |
| 第3章 半理性设计提高酯酶rPPE01的催化活性 | 第50-61页 |
| 3.1 前言 | 第50-52页 |
| 3.2 材料方法 | 第52-54页 |
| 3.2.1 分子生物学试剂 | 第52页 |
| 3.2.2 同源建模和分子对接 | 第52页 |
| 3.2.3 突变体构建以及蛋白表达 | 第52-53页 |
| 3.2.4 底物/产物定量分析 | 第53-54页 |
| 3.2.5 动力学参数测定 | 第54页 |
| 3.2.6 突变体和母本稳定性比较 | 第54页 |
| 3.2.7 rPPE01和突变体拆分AcO-CPA的比较 | 第54页 |
| 3.3 结果讨论 | 第54-59页 |
| 3.3.1 rPPE01建模及分子对接 | 第54-55页 |
| 3.3.2 突变体纯化及动力学参数测定 | 第55-56页 |
| 3.3.3 rPPE01_(W187H)与母本催化性质的比较 | 第56-59页 |
| 3.3.4 rPPE01_(W187H)和母本催化AcO-CPA的拆分反应 | 第59页 |
| 3.4 本章小结 | 第59-61页 |
| 第4章 手性羟基酸拆分反应底物形式的优化 | 第61-68页 |
| 4.1 引言 | 第61-62页 |
| 4.2 材料方法 | 第62-63页 |
| 4.2.1 试剂 | 第62页 |
| 4.2.2 酰氧基邻氯苯乙酸甲酯合成 | 第62页 |
| 4.2.3 rPPE01对2-乙酰氧基邻氯苯乙酸甲酯的动力学参数测定 | 第62页 |
| 4.2.4 不同阳离子的比较 | 第62页 |
| 4.2.5 重要光学纯手性羟基酸制备 | 第62-63页 |
| 4.3 结果讨论 | 第63-67页 |
| 4.3.1 底物羟基酸酯的化学改造 | 第63-64页 |
| 4.3.2 反应体系中阳离子的优化 | 第64页 |
| 4.3.3 重要手性羟基酸的酶法制备 | 第64-66页 |
| 4.3.4 与其他手性羟基酸拆分途径的比较 | 第66-67页 |
| 4.4 小结 | 第67-68页 |
| 第5章 酯酶rPPE01_(W187H)的固定化研究 | 第68-80页 |
| 5.1 前言 | 第68-69页 |
| 5.2 材料与方法 | 第69-71页 |
| 5.2.1 主要试剂和设备 | 第69-70页 |
| 5.2.2 分析方法 | 第70页 |
| 5.2.3 重组大肠杆菌的培养及粗酶粉制备 | 第70页 |
| 5.2.4 固定化酶的制备 | 第70页 |
| 5.2.5 固定化载体筛选 | 第70页 |
| 5.2.6 固定化过程的优化 | 第70-71页 |
| 5.2.7 固定化酶催化性质的表征 | 第71页 |
| 5.2.8 固定化酶和游离酶的稳定性比较 | 第71页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第71-79页 |
| 5.3.1 固定化树脂的筛选 | 第71-74页 |
| 5.3.2 固定化过程的优化 | 第74-75页 |
| 5.3.3 固定化酶性能的表征 | 第75-79页 |
| 5.4 本章小结 | 第79-80页 |
| 第6章 构建填充床反应器连续拆分手性2-羟基邻氯苯乙酸 | 第80-93页 |
| 6.1 前言 | 第80-84页 |
| 6.2 材料方法 | 第84-86页 |
| 6.2.1 主要试剂与设备 | 第84页 |
| 6.2.2 初始pH以及缓冲液浓度对反应的影响 | 第84页 |
| 6.2.3 填充床反应器以及连续反应装置 | 第84页 |
| 6.2.4 填充床反应器的参数优化 | 第84-85页 |
| 6.2.5 底物浓度对填充床反应器生产能力的影响 | 第85页 |
| 6.2.6 填充床反应器长期操作稳定性的研究 | 第85页 |
| 6.2.7 产物分离和纯化 | 第85-86页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第86-91页 |
| 6.3.1 操作模式的选择以及影响因素分析 | 第86-87页 |
| 6.3.2 填充床反应器的构建 | 第87-91页 |
| 6.3.3 连续反应器的操作稳定性研究 | 第91页 |
| 6.4 本章小结 | 第91-93页 |
| 第7章 总结及展望 | 第93-98页 |
| 7.1 全文总结 | 第93-94页 |
| 7.2 手性羟基酸拆分过程分析 | 第94-96页 |
| 7.2.1 成本分析 | 第94-95页 |
| 7.2.2 环境友好性分析 | 第95-96页 |
| 7.3 论文创新点 | 第96页 |
| 7.4 展望 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-113页 |
| 攻读博士期间论文发表和专利公开情况 | 第113-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 附录 | 第115-128页 |
