| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-34页 |
| 1.1 水产养殖弧菌病害和疫苗防治 | 第13-15页 |
| 1.2 鱼类的T细胞免疫 | 第15-25页 |
| 1.2.1 鱼类T细胞 | 第16-18页 |
| 1.2.2 鱼类T细胞的信号转导相关分子 | 第18-19页 |
| 1.2.3 鱼类初始T细胞、效应T细胞和记忆T细胞的标识物分子 | 第19-20页 |
| 1.2.4 鱼类的细胞毒性淋巴细胞相关分子 | 第20页 |
| 1.2.5 鱼类辅助性T细胞和Th17细胞相关分子 | 第20-23页 |
| 1.2.6 鱼类T淋巴细胞的功能 | 第23-25页 |
| 1.3 鱼类黏膜免疫系统 | 第25-30页 |
| 1.3.1 鱼类的黏膜免疫部位 | 第25-26页 |
| 1.3.2 鱼类黏膜部位的非特异性免疫 | 第26页 |
| 1.3.3 鱼类黏膜部位的适应性免疫 | 第26-29页 |
| 1.3.4 鱼类黏膜免疫系统与系统性免疫间的关系 | 第29页 |
| 1.3.5 鱼类黏膜免疫系统的调节 | 第29-30页 |
| 1.4 白三烯B4和白三烯B4受体 | 第30-33页 |
| 1.4.1 白三烯B4的合成 | 第30页 |
| 1.4.2 白三烯B4受体 | 第30-31页 |
| 1.4.3 BLT1和BLT2的功能 | 第31-33页 |
| 1.4.4 鱼类白三烯及其受体 | 第33页 |
| 1.5 论文的主要内容及意义 | 第33-34页 |
| 第2章 疫苗浸泡接种斑马鱼后脾脏的转录组分析 | 第34-58页 |
| 2.1 引言 | 第34页 |
| 2.2 实验材料 | 第34-36页 |
| 2.2.1 菌株和试验动物 | 第34页 |
| 2.2.2 药品、设备和技术服务 | 第34页 |
| 2.2.3 培养基和引物 | 第34-36页 |
| 2.3 实验方法 | 第36-40页 |
| 2.3.1 斑马鱼饲养 | 第36页 |
| 2.3.2 鳗弧菌减毒活疫苗菌株培养及菌液制备 | 第36-37页 |
| 2.3.3 斑马鱼的浸泡接种 | 第37-38页 |
| 2.3.4 接种后斑马鱼的脾脏组织取样 | 第38页 |
| 2.3.5 RNA抽提和逆转录cDNA | 第38-39页 |
| 2.3.6 RNA标记、芯片杂交、数据采集和处理 | 第39页 |
| 2.3.7 实时荧光定量PCR | 第39-40页 |
| 2.4 实验结果 | 第40-53页 |
| 2.4.1 标准化后基因表达数据的质量评估 | 第40页 |
| 2.4.2 差异表达基因的筛选 | 第40页 |
| 2.4.3 差异表达基因的GO和KEGG通路分析 | 第40-43页 |
| 2.4.4 基因芯片数据结果的验证 | 第43-44页 |
| 2.4.5 差异表达的先天性免疫相关基因 | 第44-48页 |
| 2.4.6 差异表达的适应性免疫相关基因 | 第48-50页 |
| 2.4.7 浸泡接种后Th17相关基因的表达时相分析 | 第50-53页 |
| 2.4.8 适应性免疫相关信号通路的调节 | 第53页 |
| 2.5 实验讨论 | 第53-57页 |
| 2.6 本章小结 | 第57-58页 |
| 第3章 不同接种方式诱导的斑马鱼Th17细胞样黏膜免疫 | 第58-77页 |
| 3.1 引言 | 第58页 |
| 3.2 实验材料 | 第58-60页 |
| 3.2.1 菌株和试验动物 | 第58-59页 |
| 3.2.2 药品、试剂和仪器设备 | 第59页 |
| 3.2.3 培养基和引物 | 第59-60页 |
| 3.3 实验方法 | 第60-62页 |
| 3.3.1 斑马鱼的注射接种 | 第60页 |
| 3.3.2 接种后斑马鱼的浸泡攻毒 | 第60-61页 |
| 3.3.4 接种和攻毒后斑马鱼的组织取样 | 第61-62页 |
| 3.3.5 实时荧光定量PCR | 第62页 |
| 3.4 实验结果 | 第62-67页 |
| 3.4.1 不同接种方式的免疫保护力 | 第62页 |
| 3.4.2 不同接种方式诱导的黏膜组织Th1和Th2细胞相关基因的表达 | 第62页 |
| 3.4.3 不同接种方式诱导的黏膜组织Th17细胞相关基因的表达 | 第62-64页 |
| 3.4.4 疫苗接种的斑马鱼攻毒后黏膜组织Th1和Th2细胞相关基因的表达 | 第64-65页 |
| 3.4.5 疫苗接种的斑马鱼攻毒后黏膜组织Th17细胞相关基因的表达 | 第65-67页 |
| 3.5 实验讨论 | 第67-76页 |
| 3.6 本章小结 | 第76-77页 |
| 第4章 浸泡接种大菱鲆的免疫保护力和免疫应答 | 第77-88页 |
| 4.1 引言 | 第77页 |
| 4.2 实验材料 | 第77-78页 |
| 4.2.1 菌株和实验动物 | 第77页 |
| 4.2.2 药品、试剂和仪器设备 | 第77页 |
| 4.2.3 培养基、缓冲液和引物 | 第77-78页 |
| 4.3 实验方法 | 第78-81页 |
| 4.3.1 大菱鲆的浸泡接种和浸泡攻毒 | 第78-80页 |
| 4.3.2 接种和攻毒后大菱鲆的组织取样 | 第80页 |
| 4.3.3 大菱鲆血清特异性抗体水平的测定 | 第80-81页 |
| 4.4 实验结果 | 第81-86页 |
| 4.4.1 浸泡接种后攻毒大菱鲆的免疫保护力 | 第81页 |
| 4.4.2 接种和攻毒后不同组织中Th17细胞相关基因的表达 | 第81-83页 |
| 4.4.3 接种和攻毒后大菱鲆抗体水平变化 | 第83-86页 |
| 4.5 实验讨论 | 第86-87页 |
| 4.6 本章小结 | 第87-88页 |
| 第5章 大菱鲆白三烯B4受体的克隆及功能鉴定 | 第88-106页 |
| 5.1 引言 | 第88-90页 |
| 5.2 实验材料 | 第90-92页 |
| 5.2.1 菌株和细胞株 | 第90页 |
| 5.2.2 药品、材料和仪器设备 | 第90页 |
| 5.2.3 质粒和引物 | 第90页 |
| 5.2.4 培养基和缓冲液 | 第90-92页 |
| 5.3 实验方法 | 第92-95页 |
| 5.3.0 大菱鲆组织取样 | 第92页 |
| 5.3.1 总RNA抽提 | 第92页 |
| 5.3.2 SMART cDNA的合成 | 第92页 |
| 5.3.3 大菱鲆BLT1基因3’端和5’端RACE扩增 | 第92-93页 |
| 5.3.4 PCR产物回收 | 第93页 |
| 5.3.5 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第93-94页 |
| 5.3.6 回收片段连接和感受态细胞转化 | 第94页 |
| 5.3.7 大菱鲆BLT1基因真核表达质粒的构建 | 第94页 |
| 5.3.8 质粒抽提和CHO细胞的瞬时转染 | 第94-95页 |
| 5.4 实验结果 | 第95-102页 |
| 5.4.1 大菱鲆肾脏总RNA的提取 | 第95页 |
| 5.4.2 BLT1基因5’与3'RACE结果 | 第95-97页 |
| 5.4.3 BLT1基因全长cDNA的克隆、序列分析和蛋白结构预测 | 第97-99页 |
| 5.4.4 大菱鲆BLT1基因的同源比对和进化树分析 | 第99页 |
| 5.4.5 大菱鲆BLT1基因的组织分布 | 第99-100页 |
| 5.4.6 大菱鲆BLT1基因在减毒活疫苗浸泡接种和攻毒条件下的表达 | 第100页 |
| 5.4.7 大菱鲆BLT1基因的异源表达 | 第100-102页 |
| 5.5 实验讨论 | 第102-105页 |
| 5.6 本章小结 | 第105-106页 |
| 第6章 主要结论和创新点 | 第106-109页 |
| 6.1 主要结论 | 第106-107页 |
| 6.2 创新点 | 第107页 |
| 6.3 展望 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-120页 |
| 攻读博士学位期间撰写的论文 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121页 |
