| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 序言 | 第12-20页 |
| 1.1 药物的转运机制 | 第12-13页 |
| 1.2 转运体 | 第13-16页 |
| 1.3 药物-药物相互作用 | 第16-17页 |
| 1.4 本课题的立题思路及研究内容 | 第17-20页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第20-35页 |
| 2.1 材料及试剂 | 第20页 |
| 2.2 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-35页 |
| 2.3.1 MDCKII-hMDR1 细胞培养 | 第21页 |
| 2.3.2 MDCKII-hMDR1 细胞株抗性的测定 | 第21-22页 |
| 2.3.2.1 G418 和潮霉素 B（Hygromycin B）工作液的配制 | 第21页 |
| 2.3.2.2 MDCKII-hMDR1 细胞株抗性的测定 | 第21-22页 |
| 2.3.3 hBCRP 质粒的构建 | 第22-28页 |
| 2.3.3.1 MDCKII-hBCRP 细胞中 hBCRP 总 RNA 的抽提 | 第22页 |
| 2.3.3.2 hBCRP RNA 反转录 | 第22-23页 |
| 2.3.3.3 hBCRP 基因的扩增 | 第23-24页 |
| 2.3.3.3.1 引物设计 | 第23页 |
| 2.3.3.3.2 hBCRP 基因 PCR 扩增 | 第23-24页 |
| 2.3.3.3.3 PCR 扩增产物凝胶电泳分离 | 第24页 |
| 2.3.3.4 质粒与目的基因双酶切处理 | 第24-25页 |
| 2.3.3.5 质粒和目的基因的回收 | 第25-26页 |
| 2.3.3.6 带有双粘性末端载体 pcDNA3.1/Hygro 与目的基因的连接 | 第26页 |
| 2.3.3.7 大肠杆菌感受态的制备与重组子的细菌转化 | 第26-27页 |
| 2.3.3.8 重组克隆菌的筛选与鉴定 | 第27页 |
| 2.3.3.9 质粒的抽提与测序 | 第27-28页 |
| 2.3.4 共表达细胞株 MDCKII-hMDR1/hBCRP 的建立 | 第28-30页 |
| 2.3.4.1 MDCKII-hMDR1 细胞的培养 | 第28页 |
| 2.3.4.2 MDCKII-hMDR1 细胞转染 | 第28-29页 |
| 2.3.4.2.1 MDCKII-hMDR1 悬浮细胞的制备 | 第28-29页 |
| 2.3.4.2.2 脂质体法转染 MDCKII-hMDR1 细胞 | 第29页 |
| 2.3.4.3 转染细胞 MDCK-hMDR1/hBCRP 单克隆的筛选与鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.4.4 转染细胞 MDCKII-hMDR1/hBCRP 的传代培养 | 第30页 |
| 2.3.5 共表达细胞 MDCKII-hMDR1/hBCRP 生物学功能研究 | 第30-35页 |
| 2.3.5.1 跨膜转运实验 | 第30-31页 |
| 2.3.5.2 P-gp 或 BCRP 抑制实验 | 第31页 |
| 2.3.5.3 运用 LC-MS/MS 进行样品分析 | 第31-35页 |
| 2.3.5.3.1 色谱条件 | 第31页 |
| 2.3.5.3.2 质谱条件 | 第31-33页 |
| 2.3.5.3.3 生物样品处理方法 | 第33页 |
| 2.3.5.3.4 数据分析 | 第33-35页 |
| 第三章 结果 | 第35-46页 |
| 3.1 MDCKII-HMDR1 细胞抗性的测定结果 | 第35页 |
| 3.2 MDCKII-HBCRP 细胞 HBCRP 总 RNA 的抽提 | 第35页 |
| 3.3 HBCRP 基因 PCR 扩增产物的糖凝胶电泳分离 | 第35-36页 |
| 3.4 真核表达载体 PCDNA3.1/HYGRO/HBCRP 的鉴定 | 第36-38页 |
| 3.5 MDCKII-HMDR1/HBCRP 共表达细胞株的建立及鉴定 | 第38-39页 |
| 3.6 P-GP 和 BCRP 转运体介导的跨膜转运实验 | 第39-46页 |
| 3.6.1 MDCKII-hMDR1 和 MDCKII-hBCRP 细胞中外排转运体 P-gp 和 BCRP 的功能评估 | 第39-40页 |
| 3.6.2 共表达细胞株 MDCKII-hMDR1/hBCRP 介导的单曲宁跨膜转运 | 第40-41页 |
| 3.6.3 共表达细胞株 MDCKII-hMDR1/hBCRP 介导的伊马替尼跨膜转运 | 第41-44页 |
| 3.6.4 共表达细胞株 MDCKII-hMDR1/hBCRP 介导的索拉菲尼跨膜转运 | 第44-46页 |
| 第四章 结论与展望 | 第46-49页 |
| 4.1 讨论与结论 | 第46-48页 |
| 4.2 展望 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 缩略语说明 | 第54-56页 |
