| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第12-20页 |
| 1.1 犬瘟热概述 | 第12页 |
| 1.2 犬瘟热病毒特征 | 第12-14页 |
| 1.3 犬瘟热疫苗 | 第14-16页 |
| 1.4 狂犬病概况 | 第16-17页 |
| 1.5 狂犬病病毒的特征 | 第17页 |
| 1.6 狂犬病疫苗现状及反向遗传学在狂犬病的应用 | 第17-18页 |
| 1.7 本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 1.8 本实验的技术路线 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-42页 |
| 2.1 材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 质粒、毒株、动物 | 第20页 |
| 2.1.2 酶类及其它相关试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 细菌及细菌培养相关试剂 | 第21页 |
| 2.1.4 细胞及其相关培养试剂 | 第21页 |
| 2.1.5 实验相关缓冲液 | 第21-22页 |
| 2.1.6 主要仪器及耗材 | 第22-23页 |
| 2.2 方法 | 第23-42页 |
| 2.2.1 携带H基因重组狂犬病病毒全长cDNA质粒的构建 | 第23-27页 |
| 2.2.2 含有双G和H基因的重组狂犬病病毒全长c DNA质粒的构建 | 第27-29页 |
| 2.2.3 重组病毒的拯救 | 第29-31页 |
| 2.2.4 重组病毒的传代 | 第31页 |
| 2.2.5 重组病毒的鉴定 | 第31-33页 |
| 2.2.6 重组病毒滴度的测定 | 第33页 |
| 2.2.7 病毒生长曲线的绘制 | 第33页 |
| 2.2.8 病毒在细胞上的扩散实验 | 第33页 |
| 2.2.9 病毒感染细胞后病毒各基因在转录水平上表达的检测 | 第33-36页 |
| 2.2.10 重组病毒在BHK-21细胞上主要蛋白的表达量的检测 | 第36-38页 |
| 2.2.11 重组病毒对乳鼠半数致死量的测定 | 第38页 |
| 2.2.12 重组病毒对6周龄成鼠的致病性 | 第38页 |
| 2.2.13 重组病毒对小鼠的免疫原性和攻毒保护实验 | 第38-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-51页 |
| 3.1 CDV-H基因的RT-PCR扩增结果 | 第42页 |
| 3.2 携带双G和H基因的重组狂犬病病毒全长基因组c DNA质粒的构建 | 第42-44页 |
| 3.2.1 酶切、连接获得重组质粒 | 第42-43页 |
| 3.2.2 重组质粒pHEP-dG（H）的酶切鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3 重组病毒的拯救和筛选 | 第44页 |
| 3.4 重组病毒的鉴定 | 第44-45页 |
| 3.4.1 重组病毒的RT-PCR鉴定 | 第44-45页 |
| 3.4.2 重组病毒的测序鉴定 | 第45页 |
| 3.5 重组病毒的各代次滴度的测定 | 第45页 |
| 3.6 重组病毒的体外生长曲线绘制 | 第45-46页 |
| 3.7 重组病毒在BHK-21细胞上的感染扩散能力 | 第46页 |
| 3.8 重组病毒的各基因转录水平的表达 | 第46-47页 |
| 3.9 重组病毒感染细胞中主要蛋白的Western blot检测 | 第47-48页 |
| 3.10 重组病毒的致病性 | 第48-50页 |
| 3.10.1 重组病毒对乳鼠的毒力 | 第48-49页 |
| 3.10.2 重组病毒对成鼠体重的影响 | 第49-50页 |
| 3.11 重组病毒的免疫原性与攻毒保护 | 第50-51页 |
| 3.11.1 重组病毒免疫小鼠后的抗体水平 | 第50页 |
| 3.11.2 重组病毒免疫小鼠后的攻毒保护结果 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-55页 |
| 4.1 外源基因的CDV-H的选择 | 第51页 |
| 4.2 在狂犬病病毒基因组引入外源基因位点的选择 | 第51-52页 |
| 4.3 目的基因的鉴定与H蛋白表达的检测 | 第52页 |
| 4.4 重组病毒在细胞上的增殖能力 | 第52页 |
| 4.5 CDV抗体水平的检测 | 第52-53页 |
| 4.6 重组病毒对动物致病性的变化 | 第53页 |
| 4.7 HEP-dG（H）作为疫苗的有效性 | 第53-54页 |
| 4.8 结论 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录：硕士期间发表文章 | 第62页 |
