| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1. 前言 | 第13-22页 |
| 1.1 白蚁的生物学特征 | 第13页 |
| 1.2 白蚁的肠道内环境 | 第13-14页 |
| 1.3 白蚁肠道内主要共生物的种类及功能 | 第14-21页 |
| 1.3.1 白蚁后肠内的原生动物 | 第15-16页 |
| 1.3.2 白蚁肠道内同型产乙酸菌及其功能 | 第16-18页 |
| 1.3.3 白蚁肠道的共生古菌及功能 | 第18-20页 |
| 1.3.4 白蚁肠道内其他的耗氢微生物 | 第20-21页 |
| 1.4 研究意义 | 第21-22页 |
| 2. 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1 黑胸散白蚁的采集与喂养 | 第22页 |
| 2.2 常用溶液及试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.1 缓冲液和常用溶液 | 第22-23页 |
| 2.2.2 分子生物学实验所用试剂 | 第23页 |
| 2.3 培养基 | 第23-24页 |
| 2.4 实验仪器设备 | 第24-25页 |
| 3. 实验方法 | 第25-32页 |
| 3.1 白蚁的人工处理 | 第25页 |
| 3.1.1 供试药物 | 第25页 |
| 3.1.2 供试白蚁 | 第25页 |
| 3.1.3 方法 | 第25页 |
| 3.2 白蚁释放甲烷的检测 | 第25页 |
| 3.3 抑制剂处理白蚁肠道后微生物菌群的分析 | 第25-27页 |
| 3.3.1 抑制剂处理白蚁全肠DNA提取 | 第25-26页 |
| 3.3.2 DNA含量测定及检测 | 第26页 |
| 3.3.3 白蚁肠道内共生菌16S rRNA基因的Meta测序 | 第26-27页 |
| 3.4 白蚁肠道内同型产乙酸菌及甲烷菌多样性的分析 | 第27-29页 |
| 3.4.1 白蚁全肠DNA的提取 | 第27页 |
| 3.4.2 同型产乙酸菌FTFHS基因及甲烷菌mcrA基因的PCR扩增 | 第27-28页 |
| 3.4.3 PCR产物纯化、连接、转化 | 第28页 |
| 3.4.4 RFLP分析 | 第28页 |
| 3.4.5 序列分析及系统发育树的构建 | 第28-29页 |
| 3.5 白蚁肠道内还原产乙酸菌FTHFS基因的T-RFLP分析 | 第29页 |
| 3.5.1 FTHFS基因的PCR扩增 | 第29页 |
| 3.5.2 PCR产物的限制性酶切 | 第29页 |
| 3.5.3 T-RFLP分析 | 第29页 |
| 3.6 qRT-PCR检测FTHFS基因和mcrA基因活性的变化 | 第29-32页 |
| 3.6.1 全肠总DNA的提取 | 第29页 |
| 3.6.2 引物设计及检测 | 第29-30页 |
| 3.6.3 制备重组质粒 | 第30页 |
| 3.6.4 质粒拷贝数的计算 | 第30页 |
| 3.6.5 酶切鉴定 | 第30-31页 |
| 3.6.6 标准样品的制备 | 第31页 |
| 3.6.7 实时荧光定量PCR条件优化 | 第31页 |
| 3.6.8 实时荧光定量PCR扩增曲线的构建 | 第31-32页 |
| 4. 实验结果 | 第32-50页 |
| 4.1 白蚁的人工喂养 | 第32页 |
| 4.2 BES和甲硝唑对黑胸散白蚁甲烷释放量的影响 | 第32-34页 |
| 4.3 抑制剂对黑胸散白蚁肠道共生微生物菌群结构的影响 | 第34-38页 |
| 4.3.1 抑制剂处理的白蚁肠道DNA提取及纯度检测 | 第34-35页 |
| 4.3.2 16S rRNA基因V4区的检测结果 | 第35页 |
| 4.3.3 Meta测序数据分析 | 第35-36页 |
| 4.3.4 抑制剂对白蚁肠道共生菌群落组成及多样性的影响 | 第36-38页 |
| 4.4 抑制剂对同型产乙酸菌和甲烷菌种群结构的影响 | 第38-44页 |
| 4.4.1 抑制剂对黑胸散白蚁肠道同型产乙酸菌种群结构的影响 | 第38-41页 |
| 4.4.2 抑制剂对黑胸散白蚁肠道甲烷菌种群结构的影响 | 第41-44页 |
| 4.5 抑制剂处理白蚁肠道后还原产乙酸菌的T-RFLP分析 | 第44-46页 |
| 4.5.1 甲硝唑处理黑胸散白蚁肠道的FTHFS基因荧光PCR扩增 | 第44-45页 |
| 4.5.2 FTHFS基因的T-RFLP分析 | 第45-46页 |
| 4.6 qRT-PCR测定抑制剂处理后白蚁肠道同型产乙酸菌和甲烷菌的数量变化 | 第46-50页 |
| 4.6.1 普通PCR验证引物的特异性 | 第46-47页 |
| 4.6.2 同型产乙酸菌含量标准曲线的构建 | 第47-48页 |
| 4.6.3 甲烷菌含量标准曲线的构建 | 第48-50页 |
| 5. 讨论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
