| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 符号与缩略语 | 第11-12页 |
| 常用单位 | 第12-13页 |
| 1 引言 | 第13-20页 |
| 1.1 TK1的研究历程 | 第13-14页 |
| 1.2 TK1的结构 | 第14页 |
| 1.3 TK1的生物学特性 | 第14-15页 |
| 1.4 TK1与肿瘤关系的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.4.1 TK1与血液系统肿瘤 | 第15-16页 |
| 1.4.2 TK1与非霍奇金淋巴瘤 | 第16页 |
| 1.4.3 TK1与实体瘤 | 第16-17页 |
| 1.5 临床应用 | 第17-18页 |
| 1.5.1 肿瘤早期筛查 | 第17页 |
| 1.5.2 治疗的监测和预后 | 第17-18页 |
| 1.5.3 基因治疗 | 第18页 |
| 1.6 检测方法 | 第18-19页 |
| 1.7 课题研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 2 实验材料和实验方法 | 第20-52页 |
| 2.1 材料 | 第20-33页 |
| 2.1.1 BL21-p ET32a-TK1重组菌 | 第20页 |
| 2.1.2 检测血清 | 第20页 |
| 2.1.3 实验动物与细胞株 | 第20页 |
| 2.1.4 主要试剂及材料 | 第20-21页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.1.6 PCR引物 | 第22页 |
| 2.1.7 主要试剂配制 | 第22-33页 |
| 2.2 方法 | 第33-52页 |
| 2.2.1 构建BL21-pET32a-TK1重组菌 | 第33-37页 |
| 2.2.2 TK1诱导表达及鉴定 | 第37-40页 |
| 2.2.3 TK1单克隆抗体的制备 | 第40-45页 |
| 2.2.4 TK1单克隆抗体的鉴定 | 第45-47页 |
| 2.2.5 TK1抗体配对筛选及化学发光检测方法的初步建立 | 第47-52页 |
| 3 实验结果与分析 | 第52-64页 |
| 3.1 构建BL21-p ET32a-TK1重组菌 | 第52-53页 |
| 3.1.1 合成TK1基因序列 | 第52页 |
| 3.1.2 PCR扩增TK1基因 | 第52页 |
| 3.1.3 重组质粒双酶切鉴定 | 第52-53页 |
| 3.2 TK1诱导表达及鉴定 | 第53-56页 |
| 3.2.1 TK1初步诱导SDS-PAGE检测 | 第53-54页 |
| 3.2.2 TK1诱导表达条件优化 | 第54-55页 |
| 3.2.3 纯化TK1重组蛋白 | 第55-56页 |
| 3.2.4 Western blot检测TK1重组蛋白抗原性 | 第56页 |
| 3.3 TK1单克隆抗体的制备 | 第56-59页 |
| 3.3.1 ELISA间接检测方法建立 | 第56-57页 |
| 3.3.2 抗体血清效价检测 | 第57页 |
| 3.3.3 筛选阳性单克隆细胞 | 第57-58页 |
| 3.3.4 细胞株稳定性测定结果 | 第58-59页 |
| 3.3.5 单克隆抗体浓度测定 | 第59页 |
| 3.4 单克隆抗体鉴定 | 第59-60页 |
| 3.4.1 单克隆抗体亚型鉴定 | 第59页 |
| 3.4.2 单克隆抗体纯度鉴定 | 第59-60页 |
| 3.4.3 单克隆抗体特异性鉴定 | 第60页 |
| 3.5 单抗配对及化学发光检测方法初步建立 | 第60-64页 |
| 3.5.1 单克隆抗体配对筛选 | 第60-61页 |
| 3.5.2 化学发光检测体系建立 | 第61页 |
| 3.5.3 线性范围 | 第61-62页 |
| 3.5.4 精密性检测 | 第62页 |
| 3.5.5 灵敏性检测 | 第62-63页 |
| 3.5.6 回收率检测 | 第63页 |
| 3.5.7 稳定性检测 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-67页 |
| 4.1 表达载体选择 | 第64页 |
| 4.2 阳性杂交瘤细胞株筛选 | 第64页 |
| 4.3 单克隆抗体纯化 | 第64-65页 |
| 4.4 室内参考品的制备 | 第65页 |
| 4.5 化学发光检测方法的初步建立 | 第65-67页 |
| 5 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 个人简历 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
