| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 中英文缩略词表 | 第10-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-25页 |
| 1.1 热应激概述 | 第11页 |
| 1.1.1 热应激的概念 | 第11页 |
| 1.1.2 热应激的评判指标 | 第11页 |
| 1.2 热应激对机体的影响 | 第11-18页 |
| 1.2.1 热应激对肝脏的影响 | 第12-14页 |
| 1.2.2 热应激对肺的影响 | 第14-15页 |
| 1.2.3 热应激对公畜繁殖性能的影响 | 第15-16页 |
| 1.2.4 热应激对母畜繁殖性能的影响 | 第16-17页 |
| 1.2.5 热应激对消化系统的影响 | 第17-18页 |
| 1.3 miR-1246 概述 | 第18-22页 |
| 1.3.1 miR-1246 的结构 | 第18-19页 |
| 1.3.2 miR-1246 的生物合成及作用机制 | 第19-20页 |
| 1.3.3 miR-1246—靶基因的配对方式 | 第20-21页 |
| 1.3.4 miR-1246 的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.4 热应激与miRNA表达 | 第22页 |
| 1.5 miRNA与细胞凋亡及周期 | 第22-23页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 1.7 本研究的技术路线 | 第24-25页 |
| 第2章 材料与方法 | 第25-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第25页 |
| 2.1.2 双荧光素酶报告基因载体及限制性内切酶 | 第25页 |
| 2.1.3 Real-time PCR引物及miR-1246mimic、miR-1246 对照物合成 | 第25页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第25页 |
| 2.1.5 主要试剂 | 第25-27页 |
| 2.2 相关数据库及分析软件 | 第27页 |
| 2.3 相关溶液配制 | 第27-29页 |
| 2.3.1 Western Blot相关溶液 | 第27-28页 |
| 2.3.2 基因克隆溶液 | 第28页 |
| 2.3.3 细胞DAPI染色溶液 | 第28-29页 |
| 2.4 实验方法 | 第29-38页 |
| 2.4.1 靶基因生物信息学分析 | 第29页 |
| 2.4.2 双荧光素酶报告基因检测 | 第29-33页 |
| 2.4.3 实时荧光定量检测 | 第33-35页 |
| 2.4.4 Western-Blot检测 | 第35-37页 |
| 2.4.5 细胞DAPI检测 | 第37页 |
| 2.4.6 细胞凋亡检测 | 第37页 |
| 2.4.7 细胞周期检测 | 第37-38页 |
| 2.5 数据分析及处理 | 第38-41页 |
| 2.5.1 双荧光素酶报告基因 | 第38页 |
| 2.5.2 Real-time PCR | 第38页 |
| 2.5.3 Western-blot | 第38-39页 |
| 2.5.4 DAPI染色 | 第39页 |
| 2.5.5 原位荧光 | 第39页 |
| 2.5.6 细胞凋亡 | 第39页 |
| 2.5.7 细胞周期 | 第39-41页 |
| 第3章 结果与分析 | 第41-59页 |
| 3.1 靶基因预测 | 第41-45页 |
| 3.1.1 靶基因初步筛选 | 第41-42页 |
| 3.1.2 靶基因保守性分析 | 第42-43页 |
| 3.1.3 miR-1246—靶基因结合位点分析 | 第43-44页 |
| 3.1.4 靶基因通路分析 | 第44-45页 |
| 3.2 双荧光素酶报告基因系统验证 | 第45-50页 |
| 3.2.1 候选靶基因 3’UTR区常规PCR扩增 | 第45页 |
| 3.2.2 候选靶基因与载体重组 | 第45-46页 |
| 3.2.3 候选靶基因重组质粒双酶切鉴定 | 第46-47页 |
| 3.2.4 候选靶基因重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第47-48页 |
| 3.2.5 阳性克隆质粒的测序 | 第48-49页 |
| 3.2.6 PCBP2和CREBL2是miR-1246 的功能靶基因 | 第49-50页 |
| 3.3 靶基因mRNA表达水平和蛋白表达水平的变化 | 第50-53页 |
| 3.3.1 细胞RNA质量 | 第50-51页 |
| 3.3.2 Real-time PCR扩增曲线及熔解曲线分析 | 第51-52页 |
| 3.3.3 miR-1246 对CREBL2和PCBP2基因mRNA和蛋白表达的影响 | 第52-53页 |
| 3.4 miR-1246 对热应激条件下牛肺细胞凋亡的影响 | 第53-57页 |
| 3.4.1 DAPI检测 | 第53-54页 |
| 3.4.2 原位荧光检测 | 第54-55页 |
| 3.4.3 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第55-57页 |
| 3.5 流式细胞仪检测细胞周期 | 第57-59页 |
| 第4章 讨论 | 第59-63页 |
| 4.1 miR-1246 抑制PCBP2、CREBL2基因表达影响细胞凋亡 | 第59-61页 |
| 4.2 miR-1246 抑制PCBP2、CREBL2基因表达影响细胞周期进程 | 第61-63页 |
| 第5章 结论与建议 | 第63-65页 |
| 5.1 结论 | 第63页 |
| 5.2 后续研究的建议 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-75页 |
| 致谢 | 第75-77页 |
| 在读期间参与课题及发表文章 | 第77页 |
