| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 前言 | 第10-18页 |
| 1.1 抗生素替代物 | 第10页 |
| 1.2 抗菌肽的分类 | 第10-12页 |
| 1.2.1 按抗菌肽的结构分类 | 第10-11页 |
| 1.2.2 按抗菌肽的来源分类 | 第11-12页 |
| 1.3 抗菌肽的作用机理 | 第12-13页 |
| 1.3.1 抗菌肽与细胞膜的初级接触阶段 | 第12页 |
| 1.3.2 抗菌肽阈浓度及构象变化阶段 | 第12-13页 |
| 1.3.3 膜透化阶段 | 第13页 |
| 1.4 抗菌肽的应用前景 | 第13-14页 |
| 1.4.1 抗菌肽在医药行业中的应用 | 第13页 |
| 1.4.2 抗菌肽在畜牧业中的应用 | 第13-14页 |
| 1.4.3 抗菌肽在日用品中的应用 | 第14页 |
| 1.4.4 抗菌肽在食品中的应用 | 第14页 |
| 1.5 抗菌肽的获取途径 | 第14-15页 |
| 1.5.1 天然自然生物提取法 | 第14-15页 |
| 1.5.2 人工合成法 | 第15页 |
| 1.5.3 基因工程法 | 第15页 |
| 1.6 抗菌肽的基因工程研究进展 | 第15-16页 |
| 1.6.1 大肠杆菌表达系统 | 第15页 |
| 1.6.2 酵母表达系统 | 第15页 |
| 1.6.3 莱茵衣藻表达系统 | 第15-16页 |
| 1.7 本论文研究的目的与意义 | 第16页 |
| 1.8 本论文研究的内容 | 第16-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-27页 |
| 2.1.1 质粒、引物、菌种、藻种 | 第18-19页 |
| 2.1.2 试验所用试剂 | 第19-21页 |
| 2.1.3 试验所用试剂盒 | 第21页 |
| 2.1.4 试验所用仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.5 标准溶液的配制 | 第22-24页 |
| 2.1.6 核酸电泳试剂 | 第24页 |
| 2.1.7 SDS-PAGE蛋白电泳试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.8 Westernblotting相关试剂 | 第25页 |
| 2.1.9 Ni柱亲和层析缓冲液 | 第25-26页 |
| 2.1.10主要培养基配制 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-43页 |
| 2.2.1 串联抗菌肽MytichitinA的引物设计与合成 | 第27-28页 |
| 2.2.2 大肠杆菌XL1-blue的感受态制备 | 第28-29页 |
| 2.2.3 化学转化大肠杆菌XL1-blue感受态细胞 | 第29页 |
| 2.2.4 质粒提取 | 第29页 |
| 2.2.5 目的基因的获取 | 第29-33页 |
| 2.2.6 表达载体构建 | 第33-35页 |
| 2.2.7 表达载体转入莱茵衣藻 | 第35-36页 |
| 2.2.8 转基因藻种筛选 | 第36-38页 |
| 2.2.9 转基因藻种表达水平分析 | 第38页 |
| 2.2.10 转基因藻种遗传稳定性分析 | 第38页 |
| 2.2.11 转基因藻种冻存 | 第38-39页 |
| 2.2.12 Amido Black测总蛋白含量 | 第39-40页 |
| 2.2.13 Elisa测目的蛋白含量 | 第40页 |
| 2.2.14 Ni柱亲和纯化 | 第40-41页 |
| 2.2.15 抑菌活性分析 | 第41-43页 |
| 3 结果与讨论 | 第43-64页 |
| 3.1 串联抗菌肽3×MytichitinA的生物信息学分析 | 第43-46页 |
| 3.1.1 抗菌肽3×MytichitinA蛋白理化性质分析 | 第43页 |
| 3.1.2 一级结构分析 | 第43-44页 |
| 3.1.3 二级结构分析 | 第44-45页 |
| 3.1.4 三级结构预测 | 第45-46页 |
| 3.2 目的基因3×MytiA的获取 | 第46-50页 |
| 3.2.1 pBSK-MytiA-3和pBSK-3×MytiA重组质粒构建 | 第46-50页 |
| 3.3 表达载体的构建 | 第50-53页 |
| 3.3.1 pBSK-Ble-FH6-3×MytiA重组质粒的构建 | 第51-52页 |
| 3.3.2 pBSK-Hsp/Rbcs-3×MytiA-Paro重组质粒的构建 | 第52-53页 |
| 3.4 转基因藻种的筛选 | 第53-57页 |
| 3.4.1 重组质粒的线性化 | 第53-55页 |
| 3.4.2 重组质粒的电转化 | 第55页 |
| 3.4.3 转基因藻种的抗性筛选 | 第55-56页 |
| 3.4.4 Western blotting筛选转基因藻种 | 第56-57页 |
| 3.5 转基因藻种表达水平分析 | 第57-58页 |
| 3.5.1 鉴定表达量最高的转基因藻种 | 第57-58页 |
| 3.6 转基因藻种遗传稳定性分析 | 第58-59页 |
| 3.7 抗菌肽3×MytiA融合蛋白纯化 | 第59页 |
| 3.8 抗菌肽抑菌活性分析 | 第59-64页 |
| 3.8.1 MIC测定 | 第59-60页 |
| 3.8.2 抑菌圈实验 | 第60-62页 |
| 3.8.3 抗菌肽3×MytiA的稳定性研究 | 第62-64页 |
| 4 结论 | 第64-65页 |
| 5 展望 | 第65-66页 |
| 6 参考文献 | 第66-72页 |
| 7 攻读硕士期间发表论文情况 | 第72-73页 |
| 8 致谢 | 第73页 |
