| 中文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 符号说明 | 第9-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-31页 |
| 1. 四种禽呼吸道疾病及其病原学特征 | 第15-21页 |
| 1.1 禽流感概述 | 第15-16页 |
| 1.1.1 禽流感病毒病原学特征 | 第15-16页 |
| 1.1.2 禽流感病毒NP基因的研究 | 第16页 |
| 1.2 新城疫概述 | 第16-18页 |
| 1.2.1 新城疫病毒病原学特征 | 第17页 |
| 1.2.2 新城疫病毒F基因研究 | 第17-18页 |
| 1.3 鸡传染性支气管炎概述 | 第18-19页 |
| 1.3.1 鸡传染性支气管炎病毒病原学特征 | 第18-19页 |
| 1.3.2 鸡传染性支气管炎病毒N基因研究 | 第19页 |
| 1.4 鸡传染性喉气管炎概述 | 第19-21页 |
| 1.4.1 传染性喉气管炎病毒病学原学研究 | 第20页 |
| 1.4.2 鸡传染性喉气管炎病毒TK基因研究 | 第20-21页 |
| 2. 禽呼吸道疾病的常见诊断方法 | 第21-25页 |
| 2.1 病毒分离及电镜观察 | 第21-22页 |
| 2.2 免疫学诊断方法 | 第22-24页 |
| 2.2.1 病毒中和试验 | 第22页 |
| 2.2.2 血凝试验及血凝抑制试验 | 第22页 |
| 2.2.3 琼脂扩散试验 | 第22-23页 |
| 2.2.4 免疫荧光试验 | 第23页 |
| 2.2.5 酶联免疫吸附试验 | 第23页 |
| 2.2.6 胶体金技术 | 第23-24页 |
| 2.3 分子生物学诊断方法 | 第24-25页 |
| 2.3.1 聚合酶链式反应(PCR) | 第24页 |
| 2.3.2 实时荧光定量PCR | 第24页 |
| 2.3.3 环介导等温扩增 | 第24-25页 |
| 3. 传统基因芯片技术在鸡疫病检测方面的应用 | 第25-27页 |
| 3.1 基因表达谱分析 | 第25-26页 |
| 3.2 基因分型检测 | 第26页 |
| 3.3 疾病诊断 | 第26-27页 |
| 4. 可视化芯片应用的研究进展 | 第27-30页 |
| 4.1 可视化基因芯片的研究原理 | 第27-28页 |
| 4.2 可视化芯片技术的应用研究 | 第28-30页 |
| 4.2.1 可视化芯片对蛋白质的检测 | 第29页 |
| 4.2.2 可视化芯片对病原微生物的检测 | 第29页 |
| 4.2.3 可视化芯片在其他方面的应用 | 第29-30页 |
| 5. 本研究的目的与意义 | 第30-31页 |
| 第二章 AIV-NP重组质粒的构建及靶基因的复苏 | 第31-43页 |
| 1 材料 | 第31-32页 |
| 1.1 生物材料 | 第31页 |
| 1.2 主要试验仪器 | 第31页 |
| 1.3 主要试剂 | 第31-32页 |
| 2 方法 | 第32-38页 |
| 2.1 AIV的NP基因重组质粒的构建 | 第32-36页 |
| 2.1.1 引物设计 | 第32页 |
| 2.1.2 AIV基因组的抽提 | 第32-33页 |
| 2.1.3 禽流感的RT-PCR及PCR扩增 | 第33页 |
| 2.1.4 AIV-NP基因的胶回收 | 第33-34页 |
| 2.1.5 AIV-NP基因的连接 | 第34页 |
| 2.1.6 AIV-NP基因的转化 | 第34-35页 |
| 2.1.7 AIV-NP基因重组质粒鉴定 | 第35-36页 |
| 2.1.8 AIV-NP基因重组质粒菌的保存 | 第36页 |
| 2.2 靶基因的复苏及验证 | 第36-38页 |
| 2.2.1 靶基因的复苏 | 第36页 |
| 2.2.2 靶基因的验证 | 第36-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-40页 |
| 3.1 AIV-NP基因PCR鉴定结果 | 第38页 |
| 3.2 AIV-NP基因重组质粒PCR鉴定结果 | 第38-39页 |
| 3.3 AIV-NP基因测序及同源性分析结果 | 第39-40页 |
| 3.4 靶基因复苏验证结果 | 第40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 4.1 靶基因的选择 | 第40-41页 |
| 4.2 靶基因长度的选择 | 第41页 |
| 4.3 靶基因的验证 | 第41-42页 |
| 5 小结 | 第42-43页 |
| 第三章 AIV-NDV-IBV-ILTV可视化芯片的构建及评价 | 第43-61页 |
| 1 材料 | 第43-44页 |
| 1.1 生物材料 | 第43页 |
| 1.2 主要试验仪器 | 第43页 |
| 1.3 芯片杂交材料与试剂 | 第43页 |
| 1.4 其他主要材料与试剂 | 第43-44页 |
| 1.5 临床样品 | 第44页 |
| 2 方法 | 第44-48页 |
| 2.1 寡核苷酸探针设计和合成 | 第44-45页 |
| 2.2 芯片的制备 | 第45页 |
| 2.3 不对称PCR引物浓度的优化 | 第45-46页 |
| 2.4 可视化芯片检测的步骤 | 第46页 |
| 2.4.1 杂交 | 第46页 |
| 2.4.2 封闭 | 第46页 |
| 2.4.3 酶联 | 第46页 |
| 2.4.4 显色 | 第46页 |
| 2.5 可视化基因芯片的优化 | 第46-47页 |
| 2.5.1 探针基因喷样浓度的选择 | 第46-47页 |
| 2.5.2 重复喷样次数的选择 | 第47页 |
| 2.5.3 芯片杂交时间的选择 | 第47页 |
| 2.5.4 芯片杂交温度的优化 | 第47页 |
| 2.5.5 Streptavidin HRP Conjugate浓度的优化 | 第47页 |
| 2.5.6 底物(DAB)显色时间的选择 | 第47页 |
| 2.6 AIV-NDV-IBV-ILTV可视化共检芯片有效性评价 | 第47-48页 |
| 2.6.1 芯片检测特异性检验 | 第47-48页 |
| 2.6.2 芯片检测灵敏性检验 | 第48页 |
| 2.6.3 芯片保存期检验 | 第48页 |
| 2.7 AIV-NDV-IBV-ILTV可视化共检芯片的初步应用 | 第48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-57页 |
| 3.1 不对称PCR引物比例优化结果 | 第48-49页 |
| 3.2 探针基因重复喷样次数选择结果 | 第49页 |
| 3.3 寡核苷酸探针喷样浓度选择结果 | 第49-50页 |
| 3.4 AIV-NDV-IBV-ILTV可视化芯片杂交温度的优化结果 | 第50-51页 |
| 3.5 AIV-NDV-IBV-ILTV可视化芯片杂交时间优化结果 | 第51-52页 |
| 3.6 Streptavidin HRP Conjugate稀释倍数的优化结果 | 第52-53页 |
| 3.7 底物显色时间优化结果 | 第53-54页 |
| 3.8 AIV-NDV-IBV-ILTV可视化共检基因芯片的有效性 | 第54-55页 |
| 3.9 AIV-NDV-IBV-ILTV可视化共检基因芯片的特异性 | 第55页 |
| 3.10 AIV-NDV-IBV-ILTV可视化共检基因芯片的灵敏性 | 第55-56页 |
| 3.11 AIV-NDV-IBV-ILTV可视化共检基因芯片的保存期 | 第56页 |
| 3.12 AIV-NDV-IBV-ILTV可视化共检芯片的临床应用 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 4.1 关于不对称PCR技术的讨论 | 第57-58页 |
| 4.2 关于可视化芯片的条件优化的讨论 | 第58页 |
| 4.3 关于可视化芯片质量评价的讨论 | 第58-59页 |
| 4.4 关于可视化芯片临床应用的讨论 | 第59-60页 |
| 5 小结 | 第60-61页 |
| 研究创新点 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 附录 | 第70-75页 |
| 附录一：靶基因序列信息 | 第70-72页 |
| 附录二：临床样本信息表 | 第72-73页 |
| 附录三：部分临床样本检测结果图 | 第73-75页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第75页 |
