| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 文献综述 | 第13-24页 |
| 1 猪胸膜肺炎防线杆菌概述 | 第13-14页 |
| ·病原 | 第13页 |
| ·血清型 | 第13-14页 |
| ·抵抗力 | 第14页 |
| 2 参与APP定植、持续感染和诱导病变的毒力因子 | 第14-23页 |
| ·APP与下呼吸道相互作用 | 第14-22页 |
| ·参与黏附的毒力因子 | 第15-17页 |
| ·参与获取必需营养物质的毒力因子 | 第17页 |
| ·参与诱导损伤的毒力因子 | 第17-19页 |
| ·参与逃避宿主防御机制的毒力因子 | 第19-21页 |
| ·参与持续感染的毒力因子 | 第21-22页 |
| ·APP与上呼吸道和扁桃体相互作用 | 第22-23页 |
| 3 结语 | 第23-24页 |
| 1 引言 | 第24-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-36页 |
| ·质粒、抗原及血清样品 | 第26页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第26页 |
| ·基因的扩增 | 第26-27页 |
| ·引物合成 | 第26-27页 |
| ·ApxⅡA1基因的扩增 | 第27页 |
| ·ApxⅡA1基因的克隆 | 第27-28页 |
| ·目的片段的回收 | 第27-28页 |
| ·连接pMD18-T载体 | 第28页 |
| ·转化 | 第28页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第28-29页 |
| ·提取重组质粒DNA | 第28-29页 |
| ·双酶切鉴定 | 第29页 |
| ·原核表达载体构建 | 第29-30页 |
| ·pMD18-T-ApxⅡA1与pET-28a(+)的酶切 | 第29-30页 |
| ·pET-ApxⅡA1重组质粒的构建 | 第30页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第30页 |
| ·重组蛋白的诱导表达与优化 | 第30-31页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第30-31页 |
| ·重组蛋白的表达形式 | 第31页 |
| ·重组蛋白诱导时间的优化 | 第31页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| ·包涵体的分离 | 第31页 |
| ·包涵体的溶解 | 第31-32页 |
| ·重组蛋白免疫原性分析 | 第32页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第32-34页 |
| ·ELISA方法步骤 | 第32页 |
| ·抗原包被浓度及血清稀释度的确定 | 第32-33页 |
| ·最佳包被条件的确定 | 第33页 |
| ·最佳封闭条件的确定 | 第33页 |
| ·最佳血清稀释液的选择 | 第33页 |
| ·最适抗原抗体反应时间的确定 | 第33页 |
| ·最适二抗工作浓度的确定 | 第33页 |
| ·最适显色时间的确定 | 第33-34页 |
| ·阴阳临界值的确定 | 第34页 |
| ·特异性试验 | 第34页 |
| ·重复性实验 | 第34页 |
| ·批内重复性试验 | 第34页 |
| ·批间重复性试验 | 第34页 |
| ·与商品化试剂盒比较 | 第34页 |
| ·临床血清检测 | 第34-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-47页 |
| ·ApxⅡA1基因的PCR扩增 | 第36页 |
| ·PMD18-T-ApxⅡA1重组质粒的鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组表达质粒鉴定 | 第37页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·最佳诱导时间的选择 | 第38页 |
| ·融合蛋白表达形式 | 第38页 |
| ·重组蛋白免疫原性分析 | 第38-39页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第39-43页 |
| ·抗原包被浓度及血清稀释度的确定 | 第39-40页 |
| ·最佳包被条件的确定 | 第40页 |
| ·最佳封闭条件的确定 | 第40-41页 |
| ·最佳血清稀释液的确定 | 第41页 |
| ·最适抗原抗体反应时间的确定 | 第41-42页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第42页 |
| ·底物最佳显色时间的选择 | 第42-43页 |
| ·血清阴阳性临界值的判定 | 第43页 |
| ·特异性试验 | 第43-44页 |
| ·批内、批间重复性评价 | 第44-45页 |
| ·批内重复性 | 第44页 |
| ·批间重复性 | 第44-45页 |
| ·与商品化试剂盒比较 | 第45页 |
| ·江苏安徽两省部分猪场送检的血清检测结果 | 第45-46页 |
| ·南通徐州两地猪场送检各阶段猪血清检测结果 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| ·重组质粒的构建、表达与免疫原性鉴定 | 第47页 |
| ·间接ELISA方法的建立及意义 | 第47-48页 |
| ·江苏安徽两省部分猪场送检血清检测结果 | 第48-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-62页 |
| 附录 | 第62-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简介 | 第66页 |