摘要 | 第1-9页 |
Abstract | 第9-11页 |
缩略词(ABBREVIATION) | 第11-13页 |
1 文献综述 | 第13-24页 |
·肠外致病性大肠杆菌概述 | 第13-16页 |
·大肠杆菌的简介和分类 | 第13-14页 |
·肠外致病性大肠杆菌概述 | 第14页 |
·肠外致病性大肠杆菌的流行病学分析 | 第14页 |
·肠外致病性大肠杆菌的主要致病机制 | 第14-15页 |
·肠外致病性大肠杆菌的诊断和防治 | 第15-16页 |
·生物被膜概述 | 第16-20页 |
·生物被膜概述及危害 | 第16页 |
·生物被膜的形成过程及主要的参与因子 | 第16-19页 |
·生物被膜形成的调节机制 | 第19-20页 |
·大肠杆菌生物被膜的控制和清除 | 第20页 |
·大肠杆菌外膜蛋白概述 | 第20-24页 |
·外膜蛋白简介、结构、分类及功能 | 第20-21页 |
·外膜蛋白Tol C概述 | 第21-22页 |
·外膜蛋白Omp X概述 | 第22-24页 |
2.研究目的和意义 | 第24-25页 |
3.材料与方法 | 第25-35页 |
·材料 | 第25-28页 |
·菌株和质粒 | 第25-26页 |
·主要试剂、试剂盒与仪器 | 第26-27页 |
·主要培养基、抗生素及相关溶液的配置 | 第27-28页 |
·方法 | 第28-35页 |
·引物设计与合成 | 第28-29页 |
·猪源Ex PEC的复苏增殖和基因组DNA提取 | 第29页 |
·质粒的小量制备 | 第29页 |
·电转感受态细胞的制备 | 第29页 |
·WT::omp X和△tol C::omp X菌株的构建 | 第29-30页 |
·试验菌株生长特性的测定 | 第30页 |
·试验菌株对抗菌药物最小抑菌浓度(MIC)的测定 | 第30-31页 |
·细胞黏附侵袭能力测定 | 第31页 |
·巨噬细胞内存活能力测定 | 第31页 |
·生物被膜形成能力测定 | 第31-32页 |
·Curli合成能力的评价 | 第32页 |
·高渗应激环境对生物被膜的形成能力的影响 | 第32页 |
·Curli菌毛转录水平验证 | 第32-33页 |
·q RT-PCR验证高渗条件Omp X的表达量 | 第33-34页 |
·转录组分析差异基因 | 第34页 |
·数据分析 | 第34-35页 |
4.结果与分析 | 第35-46页 |
·PPECC42全基因组测序 | 第35页 |
·过表达菌株的构建并验证表达 | 第35-36页 |
·生长特性评价测定 | 第36-37页 |
·遗传稳定性评价 | 第36-37页 |
·生长曲线测定 | 第37页 |
·最小抑菌浓度(MIC)测定 | 第37-38页 |
·细胞黏附侵袭能力分析 | 第38页 |
·巨噬细胞内存活能力分析 | 第38-39页 |
·生物被膜形成能力分析 | 第39-42页 |
·生物被膜形成能力分析 | 第39-40页 |
·高渗应激对生物被膜形成的影响 | 第40页 |
·Curli合成能力评价 | 第40-41页 |
·q RT-PCR验证Curli合成相关基因csg D和csg B的转录表达 | 第41-42页 |
·q RT-PCR检测高渗条件下Omp X的表达量 | 第42页 |
·转录组分析差异基因 | 第42-46页 |
·差异基因表达分析 | 第42-43页 |
·靶标差异基因的筛选 | 第43-46页 |
5 讨论 | 第46-49页 |
·Omp X与Tol C相互作用调节细菌抗渗透应激和生物被膜的形成 | 第46页 |
·转录组学测序寻找在生物被膜和抗渗透方面的差异基因 | 第46-47页 |
·差异基因cpx P和bhs A在生物被膜和抗渗透方面的功能 | 第47-49页 |
6 结论 | 第49-50页 |
参考文献 | 第50-61页 |
附录 | 第61-62页 |
致谢 | 第62页 |