| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-14页 |
| ·L-精氨酸及其合成途径 | 第7-10页 |
| ·L-精氨酸的性质 | 第7页 |
| ·L-精氨酸的应用 | 第7页 |
| ·L-精氨酸生产菌株国内外研究概况 | 第7-8页 |
| ·L-精氨酸在钝齿棒杆菌中的代谢合成途径 | 第8-9页 |
| ·L-精氨酸代谢工程育种 | 第9-10页 |
| ·TCA循环及其代谢扰动研究 | 第10-12页 |
| ·TCA循环概述 | 第10页 |
| ·柠檬酸合酶（CS） | 第10-11页 |
| ·异柠檬酸脱氢酶（ICD） | 第11-12页 |
| ·α-酮戊二酸脱氢酶复合体（ODHC） | 第12页 |
| ·论文研究内容 | 第12-14页 |
| ·论文立题背景和研究意义 | 第12-13页 |
| ·论文研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-22页 |
| ·实验材料 | 第14-17页 |
| ·主要仪器 | 第14页 |
| ·菌株、质粒及相关引物 | 第14-16页 |
| ·主要试剂 | 第16页 |
| ·培养基及培养条件 | 第16-17页 |
| ·实验方法 | 第17-22页 |
| ·钝齿棒杆菌染色体与质粒DNA提取 | 第17-18页 |
| ·目的基因PCR扩增体系与反应条件 | 第18页 |
| ·PCR产物纯化回收及其与克隆载体pMD18-T连接 | 第18页 |
| ·大肠杆菌感受态制备与转化 | 第18页 |
| ·大肠杆菌转化子的鉴定及序列分析 | 第18页 |
| ·质粒酶切、纯化及其与基因片段的连接 | 第18页 |
| ·重组质粒pDXW10prpC2、pDXW10icd的构建 | 第18-19页 |
| ·重组大肠杆菌的蛋白表达分析 | 第19页 |
| ·酶活测定分析 | 第19-20页 |
| ·钝齿棒杆菌感受态的制备与转化 | 第20页 |
| ·重组钝齿棒杆菌阳性转化子的鉴定及质粒稳定性的检测 | 第20页 |
| ·重组钝齿棒杆菌的蛋白表达及SDS-PAGE分析 | 第20页 |
| ·钝齿棒杆菌胞内辅因子水平测定 | 第20页 |
| ·重组质粒pDXW10argC、pDXW10icd-tac-argC的构建 | 第20-21页 |
| ·发酵参数测定 | 第21-22页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第22-47页 |
| ·TCA循环关键酶对钝齿棒杆菌精氨酸合成的扰动研究 | 第22-37页 |
| ·TCA循环关键酶基因prpC2、icd的克隆及序列分析 | 第22-23页 |
| ·重组质粒pDXW10prpC2、pDXW10icd的构建及分析 | 第23-25页 |
| ·重组大肠杆菌中酶的表达及酶活力测定 | 第25-27页 |
| ·重组钝齿棒杆菌的构建及筛选 | 第27页 |
| ·重组钝齿棒杆菌胞内CS和ICD酶活力分析及辅酶测定 | 第27-29页 |
| ·重组钝齿棒杆菌的摇瓶精氨酸发酵 | 第29-30页 |
| ·重组钝齿棒杆菌 5 L发酵罐发酵实验 | 第30-33页 |
| ·重组菌SYPA 5-5/pDXW10icd代谢流分析 | 第33-34页 |
| ·重组自杀型质粒pK18mobsacB-ΔodhA的构建 | 第34-35页 |
| ·缺失基因转化子C. crenatum SYPA 5-5(ΔodhA)的筛选 | 第35-36页 |
| ·重组菌C. crenatum SYPA 5-5(ΔodhA)细胞生长研究 | 第36-37页 |
| ·异柠檬酸脱氢酶在重组钝齿棒杆菌C. crenatum SYPA 5-5(ΔproB)中过量表达 31 | 第37-40页 |
| ·重组菌SYPA 5-5(ΔproB)验证及GK酶活测定 | 第37-38页 |
| ·重组菌SYPA 5-5(ΔproB)胞内GK酶活力验证 | 第38页 |
| ·重组菌SYPA 5-5(ΔproB)/pDXW10icd的构建及筛选 | 第38-39页 |
| ·重组菌SYPA 5-5(ΔproB)/pDXW10icd的摇瓶产酸分析 | 第39页 |
| ·重组菌SYPA 5-5(ΔproB)/pDXW10icd的 5 L发酵罐产酸分析 | 第39-40页 |
| ·异柠檬酸脱氢酶和N-乙酰谷氨酸半醛脱氢酶在钝齿棒杆菌中共表达 | 第40-47页 |
| ·重组质粒pDXW10icd-tac-argC的构建及分析 | 第40-42页 |
| ·重组菌SYPA 5-5(ΔproB)/pDXW10icd-tac-argC的构建及筛选 | 第42页 |
| ·重组菌SYPA 5-5(ΔproB)/pDXW10icd-tac-argC ICD和NAGSD酶活分析 | 第42-44页 |
| ·重组质粒pDXW10icd-tac-argC质粒稳定性分析 | 第44页 |
| ·重组菌SYPA 5-5(ΔproB)/pDXW10icd-tac-argC摇瓶产酸分析 | 第44-45页 |
| ·重组菌SYPA 5-5(ΔproB)/pDXW10icd-tac-argC 5 L发酵罐产酸分析 | 第45-47页 |
| 主要结论与展望 | 第47-48页 |
| 主要结论 | 第47页 |
| 展望 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第54页 |
