| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| ·植物病毒运动蛋白研究进展 | 第11-16页 |
| ·运动蛋白的分类 | 第11-13页 |
| ·30kDa超家族蛋白 | 第11-13页 |
| ·三基因连锁(TGB)编码的蛋白 | 第13页 |
| ·调节病毒运动的细胞结构和细胞因子 | 第13-16页 |
| ·胞间连丝(plasmodesmata,PD) | 第13-14页 |
| ·内质网(ER) | 第14-15页 |
| ·细胞骨架 | 第15-16页 |
| ·水稻条纹病毒分子生物学研究进展 | 第16-21页 |
| ·基因组结构 | 第16-17页 |
| ·编码的蛋白 | 第17-21页 |
| ·RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp) | 第17-18页 |
| ·p2和pc2 | 第18-19页 |
| ·p3和pc3 | 第19-20页 |
| ·p4和pc4 | 第20-21页 |
| ·本研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 RSV pc4跨膜区对其亚细胞定位的研究 | 第22-45页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·实验材料 | 第22-24页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·菌株与载体 | 第22-24页 |
| ·仪器设备 | 第24页 |
| ·试剂 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-35页 |
| ·预测RSV pc4的跨膜结构域 | 第24页 |
| ·引物设计 | 第24-26页 |
| ·载体构建 | 第26-33页 |
| ·水稻总RNA提取(Trizol法) | 第26-28页 |
| ·反转录 | 第28页 |
| ·目的片段扩增 | 第28-29页 |
| ·PCR产物纯化 | 第29-30页 |
| ·连接 | 第30页 |
| ·大肠杆菌感受态制备 | 第30-31页 |
| ·转化和筛选 | 第31-32页 |
| ·质粒提取 | 第32页 |
| ·测序及分析 | 第32-33页 |
| ·表达载体连接及转化 | 第33页 |
| ·激光共聚焦扫描显微镜观察 | 第33-35页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·农杆菌转化及阳性克隆检测 | 第34页 |
| ·收集菌体并浸润烟草进行共聚焦观察 | 第34-35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-44页 |
| ·pc4蛋白N端跨膜区结构预测 | 第35-36页 |
| ·pc4(D)和pc4(S)载体构建 | 第36-37页 |
| ·共聚焦显微镜观察pc4(D)和pc4(S)的定位 | 第37-38页 |
| ·pc4跨膜区单个氨基酸的定位分析 | 第38-39页 |
| ·跨膜区单个氨基酸突变体载体构建及共聚焦观察 | 第39-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 第三章 RSV pc4突变体对其运动功能的影响 | 第45-54页 |
| ·引言 | 第45页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·植物材料 | 第45页 |
| ·菌株与载体 | 第45页 |
| ·仪器设备 | 第45页 |
| ·试剂 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-47页 |
| ·引物设计 | 第46页 |
| ·载体构建 | 第46页 |
| ·激光扫描显微镜观察 | 第46-47页 |
| ·农杆菌转化及阳性克隆检测 | 第46-47页 |
| ·农杆菌浸润烟草进行共聚焦观察 | 第47页 |
| ·结果与讨论 | 第47-53页 |
| ·载体构建 | 第47-48页 |
| ·pc4跨膜区对其运动功能的影响 | 第48-50页 |
| ·pc4跨膜区内单个氨基酸对其运动功能的影响 | 第50-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 第四章 RSV pc4及其突变体的核酸结合活性分析 | 第54-67页 |
| ·引言 | 第54页 |
| ·实验材料 | 第54-55页 |
| ·主要菌株与载体 | 第54-55页 |
| ·主要仪器设备 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-63页 |
| ·RSV pc4及其突变体pET32a载体构建 | 第55页 |
| ·BL21 plys S大肠杆菌菌株感受态制备及其转化 | 第55-56页 |
| ·转化菌株的阳性克隆检测及蛋白表达性检测 | 第56-57页 |
| ·阳性克隆质粒转化性检测 | 第56页 |
| ·阳性克隆蛋白表达性检测 | 第56-57页 |
| ·RSV pc4及其突变体蛋白的大量表达和包涵体纯化 | 第57-63页 |
| ·RSV pc4及其突变体蛋白的大量表达 | 第57页 |
| ·RSV pc4及其突变体包涵体蛋白的纯化 | 第57-59页 |
| ·高纯度包涵体的制备 | 第57-58页 |
| ·目的蛋白纯化 | 第58-59页 |
| ·纯化蛋白的复性 | 第59页 |
| ·RSV pc4及其突变体蛋白的结合核酸活性 | 第59-63页 |
| ·核酸的体外转录 | 第59-60页 |
| ·pc4及其突变体结合核酸的活性验证 | 第60-63页 |
| Ⅰ 探针RNA显色部分 | 第60-62页 |
| Ⅱ Western Blot杂交蛋白部分 | 第62-63页 |
| ·结果与讨论 | 第63-65页 |
| ·pc4及突变体的原核表达 | 第63-64页 |
| ·RSV pc4及其突变体结合核酸活性验证 | 第64-65页 |
| ·小结 | 第65-67页 |
| 第五章 结论与下一步工作计划 | 第67-68页 |
| ·结论 | 第67页 |
| ·下一步工作计划 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 附录：英文缩略表 | 第75-78页 |
| 附录：研究中用的培养基及缓冲液配制 | 第78-81页 |
| 致谢 | 第81-83页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第83-84页 |
