| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-18页 |
| ·本课题研究的背景及意义 | 第10页 |
| ·国内外研究现状 | 第10-16页 |
| ·Red重组系统的研究进展 | 第10-12页 |
| ·FLP/FRT重组系统的研究进展 | 第12-14页 |
| ·重组工程的应用 | 第14-16页 |
| ·本课题的研究内容 | 第16-18页 |
| 第2章 重组酶βpro基因的合成与原核表达 | 第18-38页 |
| ·材料和仪器 | 第19-21页 |
| ·实验所需药品 | 第19-20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20页 |
| ·菌株及载体 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20-21页 |
| ·各种试剂盒 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-30页 |
| ·βpro基因的合成 | 第21-24页 |
| ·纯化回收DNA | 第24-27页 |
| ·原核表达载体pET30a-βpro的构建 | 第27-29页 |
| ·重组酶βpro基因的原核表达 | 第29-30页 |
| ·结果与讨论 | 第30-37页 |
| ·βpro基因的合成 | 第31-32页 |
| ·克隆载体pEASY-βpro的构建及其鉴定 | 第32-35页 |
| ·表达载体pET30a-βpro的构建与鉴定 | 第35-36页 |
| ·βpro基因在E.coli BL21中的诱导表达以及SDS-PAGE分析 | 第36-37页 |
| ·本章小节 | 第37-38页 |
| 第3章 重组酶βpro177基因的表达载体构建、表达及活性检测 | 第38-48页 |
| ·材料和仪器 | 第38-39页 |
| ·实验所需药品 | 第38页 |
| ·菌株及载体 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·试剂 | 第38-39页 |
| ·仪器设备与实验耗材 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-43页 |
| ·βpro177基因的扩增 | 第39页 |
| ·表达载体pET30a-βpro177的构建 | 第39-41页 |
| ·重组酶βpro177基因的诱导表达及蛋白纯化 | 第41-42页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第42-43页 |
| ·β蛋白177活性检测方法的建立 | 第43页 |
| ·结果与讨论 | 第43-47页 |
| ·表达载体pET30a-βpro177的构建与鉴定 | 第43-44页 |
| ·pET30a-βpro177蛋白表达及纯化后SDS-PAGE分析 | 第44-45页 |
| ·β蛋白177含量的测定 | 第45-46页 |
| ·β蛋白177体外活性检测 | 第46-47页 |
| ·本章小节 | 第47-48页 |
| 第4章 重组酶flp基因的克隆、原核表达及活性检测 | 第48-58页 |
| ·材料和仪器 | 第48-49页 |
| ·实验所需药品 | 第48页 |
| ·菌株及载体 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48页 |
| ·试剂 | 第48页 |
| ·仪器设备与实验耗材 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-53页 |
| ·引物设计与合成 | 第49页 |
| ·目的片段的扩增 | 第49页 |
| ·表达载体pQE32-flp的构建 | 第49-51页 |
| ·大肠杆菌M15的转化 | 第51-52页 |
| ·flp基因在大肠杆菌M15中的诱导表达 | 第52页 |
| ·重组酶FLP体外活性检测 | 第52-53页 |
| ·结果与讨论 | 第53-57页 |
| ·重组载体pQE32-flp的构建 | 第53-55页 |
| ·flp基因在大肠杆菌M15中的诱导表达 | 第55页 |
| ·重组酶FLP活性检测 | 第55-57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 第5章 FLP重组酶在代谢工程中的应用 | 第58-68页 |
| ·材料和仪器 | 第59页 |
| ·实验所需药品 | 第59页 |
| ·菌株及载体 | 第59页 |
| ·培养基 | 第59页 |
| ·仪器设备与实验耗材 | 第59页 |
| ·实验方法 | 第59-64页 |
| ·引物设计与合成 | 第59-60页 |
| ·目的片段的PCR扩增 | 第60-61页 |
| ·flp基因重组表达质粒的构建 | 第61-62页 |
| ·弱氧化醋酸杆菌的转化及转化子验证 | 第62页 |
| ·Trizol法提取弱氧化醋酸杆菌中的总RNA | 第62-63页 |
| ·RT-PCR验证目的基因的表达水平 | 第63-64页 |
| ·结果与分析 | 第64-67页 |
| ·重叠延伸PCR融合启动子与flp基因 | 第64-65页 |
| ·含有启动子基因psldh、ptufb、pgen的flp基因重组质粒构建 | 第65页 |
| ·flp基因在弱氧化醋酸杆菌中的转录 | 第65-67页 |
| ·本章小节 | 第67-68页 |
| 结论 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 攻读硕士学位期间所发表的论文 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
