| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-17页 |
| ·本课题研究的背景及其意义 | 第11-12页 |
| ·国内外研究现状 | 第12-15页 |
| ·葡萄糖酸的简介 | 第12页 |
| ·葡萄糖酸的应用及其市场 | 第12-13页 |
| ·葡萄糖酸生产的的研究 | 第13-14页 |
| ·醋酸葡萄糖酸杆菌的研究 | 第14-15页 |
| ·葡萄糖脱氢酶的研究 | 第15页 |
| ·本课题的研究内容 | 第15-17页 |
| 第2章 Gluconobacter suboxydans发酵生产葡萄糖酸的生理特性 | 第17-31页 |
| ·实验仪器 | 第17-18页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·分析方法 | 第18-21页 |
| ·生长曲线的测定 | 第18页 |
| ·pH值测定 | 第18-19页 |
| ·L-山梨糖的测定 | 第19-20页 |
| ·残糖的测定 | 第20-21页 |
| ·HPLC检测葡萄糖酸 | 第21页 |
| ·培养基及其培养条件 | 第21-22页 |
| ·活化培养基(g/L) | 第21页 |
| ·固体培养基(g/L) | 第21-22页 |
| ·种子培养基(g/L) | 第22页 |
| ·发酵培养基(g/L) | 第22页 |
| ·种子培养 | 第22页 |
| ·摇瓶发酵培养 | 第22页 |
| ·J12的形态特征 | 第22-23页 |
| ·不同碳源对J12生长的影响 | 第23页 |
| ·不同初始pH值对J12生长的影响 | 第23-24页 |
| ·溶氧对J12生长的影响 | 第24页 |
| ·J12生长曲线的测定 | 第24-25页 |
| ·甘氨酸对J12生长的影响 | 第25-27页 |
| ·碳酸钙对葡萄糖酸发酵过程的影响 | 第27页 |
| ·5L发酵罐菌种能力验证实验 | 第27-29页 |
| ·本章小结 | 第29-31页 |
| 第3章 利用TAIL-PCR克隆Gluconobacter suboxydans的葡萄糖脱氢酶基因及生物信息学分析 | 第31-45页 |
| ·实验材料 | 第31-33页 |
| ·质粒与载体 | 第31-32页 |
| ·试剂 | 第32-33页 |
| ·各种试剂盒 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-38页 |
| ·J12基因组DNA的提取 | 第33页 |
| ·编码GDH的基因(gdh)保守片段的克隆 | 第33-36页 |
| ·Gdh基因全序列的克隆与分析 | 第36-38页 |
| ·序列分析 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-43页 |
| ·Gdh基因保守区中间片段的克隆 | 第38-39页 |
| ·TAIL-PCR扩增N端和C端基因序列 | 第39-40页 |
| ·Gdh全基因序列分析 | 第40-43页 |
| ·本章小结 | 第43-45页 |
| 第4章 葡萄糖脱氢酶基因的敲除 | 第45-55页 |
| ·材料和仪器 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-50页 |
| ·Gdh~-打靶片段的构建 | 第45-48页 |
| ·Gdh~-打靶片段的转化 | 第48-49页 |
| ·Gdh~-菌株的筛选与分子鉴定 | 第49页 |
| ·Gdh~-菌株的活性检测 | 第49-50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-53页 |
| ·Gdh~-打靶片段的构建 | 第50-51页 |
| ·Gdh~-菌株的筛选与分子鉴定 | 第51-52页 |
| ·Gdh~-菌株的活性检测 | 第52-53页 |
| ·本章小结 | 第53-55页 |
| 第5章 甘油脱氢酶的敲除 | 第55-63页 |
| ·材料和仪器 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-58页 |
| ·Sldh~-打靶片段的构建与转化 | 第55-57页 |
| ·Sldh~-菌株的筛选和分子鉴定 | 第57-58页 |
| ·Sldh~-菌株产酸性能研究 | 第58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-61页 |
| ·Sldh~-打靶片段的构建与转化 | 第58-59页 |
| ·Sldh~-菌株的筛选和验证 | 第59-61页 |
| ·Sldh~-菌株的产酸性能研究 | 第61页 |
| ·本章小结 | 第61-63页 |
| 第6章 葡萄糖脱氢酶基因的双倍表达突变体构建 | 第63-76页 |
| ·材料和仪器 | 第64页 |
| ·实验方法 | 第64-69页 |
| ·Gdh~+打靶片段的构建与转化 | 第64-68页 |
| ·Gdh~+菌株的筛选和分子鉴定 | 第68页 |
| ·Gdh~+菌株的产酸性能研究 | 第68-69页 |
| ·结果与讨论 | 第69-74页 |
| ·Gdh~+打靶片段的构建与转化 | 第69-71页 |
| ·Gdh~+菌株的筛选和验证 | 第71-73页 |
| ·Gdh~+菌株的产酸性能研究 | 第73-74页 |
| ·本章小结 | 第74-76页 |
| 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-81页 |
| 攻读硕士学位期间所发表的论文 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83页 |