| 第一部分 猪IκBα打靶载体构建 | 第1-53页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略语表 | 第14-15页 |
| 1 前言 | 第15-22页 |
| ·IκBα对NFκB信号通路调控及其在延缓性排斥反应中功能的研究进展 | 第15-17页 |
| ·NFκB信号通路 | 第15页 |
| ·NFκB信号通路在机体生长发育过程中的重要功能 | 第15-16页 |
| ·IκBα对延缓性排斥反应中NFκB信号通路的调控 | 第16-17页 |
| ·猪异种移植延缓性排斥反应的机理 | 第17-19页 |
| ·猪异种移植排斥反应种类及研究进展 | 第17-18页 |
| ·猪异种移植延缓性排斥反应发生的机理及解决途径 | 第18-19页 |
| ·研究目的和意义 | 第19-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-38页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·DNA样品 | 第22页 |
| ·克隆及打靶载体 | 第22-23页 |
| ·生化试剂及试剂盒 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-38页 |
| ·IκBα基因cDNA定点诱变 | 第23-25页 |
| ·IκBα野生型及突变型真核表达载体构建及真核表达实验 | 第25页 |
| ·含有突变型和野生型IκBα cDNA序列的Cre/Loxp系统构建 | 第25-29页 |
| ·打靶载体长短臂扩增及克隆 | 第29-30页 |
| ·IκBα条件性敲除打靶载体pFPC-C各元件拼接 | 第30-32页 |
| ·含内源启动子的IκBα条件打靶载体的构建 | 第32-37页 |
| ·普通打靶载体pLHG-4的构建 | 第37页 |
| ·pLHG-4基因打靶试验 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-48页 |
| ·IκBα基因cDNA定点诱变 | 第38-39页 |
| ·试剂盒定点突变 | 第38页 |
| ·重叠延伸PCR法定点突变 | 第38-39页 |
| ·克隆测序 | 第39页 |
| ·IκBα野生型及突变型真核表达载体构建及真核表达实验 | 第39-40页 |
| ·IκBα野生型及突变型真核表达载体构建 | 第39-40页 |
| ·IκBα野生型及突变型真核表达实验 | 第40页 |
| ·含有突变型和野生型IκBα cDNA序列的Cre/Loxp系统构建及验证 | 第40-42页 |
| ·打靶载体长短臂扩增及克隆 | 第42-44页 |
| ·猪血管内皮细胞PIEC培养及基因组DNA提取 | 第42页 |
| ·5’短臂的扩增及克隆 | 第42-43页 |
| ·3’长臂的扩增及克隆 | 第43-44页 |
| ·IκBα条件性敲除打靶载体pFPC-C各元件拼接 | 第44页 |
| ·含内源启动子的IκBα条件打靶载体的构建 | 第44-46页 |
| ·猪IκBα基因内源启动子序列的扩增及克隆 | 第44-45页 |
| ·含内源启动子的条件打靶载体pLHG-5的构建 | 第45页 |
| ·单独锚定筛选标记基因的条件打靶载体pLHG-6的构建 | 第45-46页 |
| ·普通打靶载体pLHG-4的构建 | 第46-47页 |
| ·pLHG-4基因打靶试验 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-52页 |
| ·IκBα基因cDNA定点诱变 | 第48页 |
| ·抑制异种移植延缓性排斥反应的途径 | 第48-49页 |
| ·载体构建中寡核苷酸的充分利用 | 第49-51页 |
| ·关于未得到阳性细胞克隆的思考 | 第51页 |
| ·关于打靶策略的反思 | 第51-52页 |
| 5 小结 | 第52-53页 |
| 第二部分 猪NFκB p65特征分析及p65RHD时空特异表达 | 第53-103页 |
| 摘要 | 第53-56页 |
| Abstract | 第56-60页 |
| 缩略语表 | 第60-61页 |
| 1 前言 | 第61-66页 |
| ·NFκB p65亚基研究进展 | 第61-62页 |
| ·p65RHD功能鉴定及应用研究进展 | 第62页 |
| ·NFκB信号通路血管内皮细胞时空特异性抑制 | 第62-63页 |
| ·血管内皮细胞保护与异种移植 | 第63-64页 |
| ·猪血管内皮细胞特异性启动子 | 第64页 |
| ·四环素诱导表达系统的原理及应用 | 第64-66页 |
| ·研究目的和意义 | 第66页 |
| 2 材料与方法 | 第66-75页 |
| ·材料 | 第66-67页 |
| ·DNA样品 | 第66页 |
| ·RNA样品 | 第66页 |
| ·载体 | 第66-67页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第67页 |
| ·方法 | 第67-75页 |
| ·细胞培养与处理 | 第67-68页 |
| ·实验猪资源群体免疫性状的测定 | 第68页 |
| ·猪NFκB p65(pp65)的克隆及表达载体构建 | 第68页 |
| ·序列比对和进化树构建 | 第68页 |
| ·转染、荧光素酶报告基因检测及免疫细胞化学检测 | 第68-70页 |
| ·实时定量PCR法检测基因相对表达 | 第70-71页 |
| ·多态位点鉴定及PCR-RFLP分型 | 第71页 |
| ·统计分析 | 第71页 |
| ·pTet-ICAM载体构建 | 第71-72页 |
| ·pp65RHD四环素可控内皮细胞特异性表达 | 第72-75页 |
| 3. 结果与分析 | 第75-98页 |
| ·pp65基因组结构分析 | 第75-76页 |
| ·猪NFκB p65(pp65)的克隆、表达载体构建及序列分析 | 第76-80页 |
| ·猪NFκB p65亚基的表达及特征分析 | 第80-85页 |
| ·pp65RHD的过表达抑制NFκB | 第85-86页 |
| ·猪p65组织表达谱 | 第86-87页 |
| ·多态检测及关联分析 | 第87-89页 |
| ·pTet-ICAM载体构建 | 第89-90页 |
| ·获取ICAM-2启动子全长 | 第89-90页 |
| ·组装pTet-ICAM载体 | 第90页 |
| ·pp65RHD四环素可控内皮细胞特异性表达 | 第90-98页 |
| ·pp65RHD四环素可控内皮细胞特异性表达系统瞬时转染PIEC细胞系 | 第90-91页 |
| ·pp65RHD四环素可控内皮细胞特异性表达系统稳定转染PIEC细胞系 | 第91-98页 |
| 4 讨论 | 第98-102页 |
| ·猪NF-κB p65结构及功能特征 | 第98-100页 |
| ·NFκB抑制因子的选择问题 | 第100-101页 |
| ·NFκB时空特异性抑制失败的原因及可能的解决办法 | 第101页 |
| ·p65RHD的亚细胞定位 | 第101页 |
| ·PIEC细胞27-20号克隆特殊现象探讨 | 第101-102页 |
| 5 小结 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 附录1 个人简历 | 第119-120页 |
| 附录2 免疫性状检测指标 | 第120-121页 |
| 附录3 免疫性状关联分析 | 第121-122页 |
| 附录4 序列 | 第122-125页 |
