| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 图表目录 | 第10-11页 |
| 论文常用中英文缩写词 | 第11-12页 |
| 文献综述 | 第12-17页 |
| 引言 | 第17-19页 |
| 1 材料与方法 | 第19-29页 |
| ·实验菌株、工程菌及质粒 | 第19页 |
| ·酶类与主要试剂(盒) | 第19页 |
| ·主要溶液与培养基的配制 | 第19-22页 |
| ·ELISA实验所用溶液 | 第19-20页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第20页 |
| ·感受态细胞制备所用溶液 | 第20页 |
| ·蛋白电泳检测所需溶液 | 第20-21页 |
| ·蛋白诱导表达所用溶液 | 第21页 |
| ·蛋白提纯所用试剂及溶液 | 第21-22页 |
| ·Protein G亲和层析所需溶液 | 第22页 |
| ·LB及含氨苄青霉素LB培养基 | 第22页 |
| ·实验动物 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·肠毒素蛋白的B细胞线性表位预测与鉴定 | 第22-23页 |
| ·SEA和SEG蛋白二级结构及柔性区域分析 | 第22-23页 |
| ·SEA和SEG蛋白亲水性、抗原性和表面可及性分析 | 第23页 |
| ·肠毒素蛋白3D结构的建模及预测表位的展示 | 第23页 |
| ·预测表位肽合成 | 第23页 |
| ·肽ELISA鉴定 | 第23页 |
| ·肠毒素多表位串联基因的设计与合成 | 第23-24页 |
| ·重组表达质粒pET-32a-AG的构建与鉴定 | 第24-25页 |
| ·表位串联基因AG的PCR扩增 | 第24页 |
| ·PCR产物和表达质粒的双酶切 | 第24页 |
| ·双酶切产物的回收纯化与连接 | 第24页 |
| ·重组表达质粒的转化与鉴定 | 第24-25页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第25页 |
| ·表达产物的定位与可溶性分析 | 第25页 |
| ·重组融合蛋白的大量表达 | 第25页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第25-26页 |
| ·肠毒素表位串联肽的多克隆抗体制备与纯化 | 第26页 |
| ·免疫原制备 | 第26页 |
| ·实验动物免疫 | 第26页 |
| ·血清抗体效价测定 | 第26页 |
| ·多克隆抗体的提纯 | 第26页 |
| ·基于表位串联肽的间接竞争ELISA方法建立 | 第26-29页 |
| ·最佳抗体稀释倍数和包被抗原工作浓度的确定 | 第26-27页 |
| ·间接竞争ELISA标准曲线的绘制 | 第27页 |
| ·间接竞争ELISA灵敏度测定 | 第27页 |
| ·间接竞争ELISA重复稳定性测定 | 第27页 |
| ·间接竞争ELISA特异性测定 | 第27-28页 |
| ·人工污染样品的回收率检测 | 第28-29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-40页 |
| ·肠毒素蛋白的B细胞线性表位预测与鉴定 | 第29-32页 |
| ·表位预测结果 | 第29-31页 |
| ·表位鉴定结果 | 第31-32页 |
| ·肠毒素多表位串联基因的设计 | 第32-33页 |
| ·重组表达质粒pET-32a-AG的构建与鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第34-36页 |
| ·肠毒素表位串联肽的多克隆抗体制备与纯化 | 第36页 |
| ·基于表位串联肽的间接竞争ELISA方法建立 | 第36-40页 |
| ·最佳抗原和抗体浓度的确定 | 第36页 |
| ·间接竞争ELISA标准曲线建立与拟合度分析 | 第36-37页 |
| ·间接竞争ELISA的灵敏度 | 第37页 |
| ·间接竞争ELISA的稳定性 | 第37-38页 |
| ·间接竞争ELISA的特异性 | 第38页 |
| ·人工污染样品的回收率 | 第38-40页 |
| 3 讨论 | 第40-43页 |
| ·建立不同血清型SE蛋白同步检测方法的重要性 | 第40页 |
| ·B细胞线性表位的鉴定与多表位串联肽的设计 | 第40-41页 |
| ·影响间接竞争ELISA方法的因素 | 第41-43页 |
| 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-50页 |
| 附录 | 第50-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 作者简介 | 第54页 |