| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 符号说明 | 第12-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-29页 |
| 第一节 VEGF概况 | 第14-17页 |
| 第二节 VEGF在肿瘤中的作用 | 第17-21页 |
| 第三节 VEGF靶向治疗 | 第21-26页 |
| 第四节 HIF-1可以上调VEGF转录 | 第26页 |
| 第五节 FHL1与Smad4与VEGF信号通路 | 第26-27页 |
| 第六节 MARKI简介 | 第27-29页 |
| 第二章 FHL1与Smad4协同抑制VEGF信号通路 | 第29-50页 |
| 第一节 实验材料 | 第29-32页 |
| ·菌株与细胞株 | 第29页 |
| ·质粒 | 第29页 |
| ·常用分子生物学试剂盒 | 第29-30页 |
| ·细胞培养试剂 | 第30页 |
| ·其他分子生物学试剂和化学试剂 | 第30页 |
| ·抗体 | 第30页 |
| ·主要实验仪器 | 第30-32页 |
| 第二节 实验方法 | 第32-42页 |
| ·重组质粒构建与鉴定 | 第32页 |
| ·siRNAs表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·哺乳动物细胞的转染 | 第33页 |
| ·荧光素酶活性测定 | 第33-34页 |
| ·实时定量PCR分析(Real-time)PCR分析 | 第34-35页 |
| ·利用PCR扩增基因片段 | 第35-36页 |
| ·限制性内切酶消化DNA片段 | 第36页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第36-37页 |
| ·DNA片段的胶回收 | 第37-38页 |
| ·DNA的连接反应 | 第38页 |
| ·大肠杆菌的制备 | 第38页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第38-39页 |
| ·重组子的筛选 | 第39页 |
| ·质粒提取 | 第39-40页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第40-41页 |
| ·Western blot分析 | 第41-42页 |
| ·肿瘤细胞体外传代培养及保种 | 第42页 |
| 第三节 实验结果 | 第42-48页 |
| ·FHL1与Smad4协同抑制VEGF启动子活性 | 第42-43页 |
| ·敲低FHLl与Smad4协同增强VEGF启动子活性 | 第43-45页 |
| ·FHL1与Smad4协同抑制VEGF启动子活性 | 第45-46页 |
| ·FHL1与Smad4协同抑制VEGF表达 | 第46-48页 |
| 第四节 讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 MARK1对VEGF信号通路的调节 | 第50-77页 |
| 第一节 实验材料 | 第50-54页 |
| ·菌株与细胞株 | 第50页 |
| ·质粒 | 第50页 |
| ·引物 | 第50-51页 |
| ·常用分子生物学试剂盒 | 第51-52页 |
| ·细胞培养试剂 | 第52页 |
| ·其他分子生物学试剂和化学试剂 | 第52页 |
| ·抗体 | 第52页 |
| ·主要实验仪器 | 第52-54页 |
| 第二节 实验方法 | 第54-65页 |
| ·重组质粒构建与鉴定 | 第54-55页 |
| ·哺乳动物细胞的转染 | 第55页 |
| ·荧光素酶活性测定 | 第55-56页 |
| ·实时定量PCR分析(Real-time)PCR分析 | 第56-57页 |
| ·利用PCR扩增基因片段 | 第57-58页 |
| ·限制性内切酶消化DNA片段 | 第58页 |
| ·DNA片段的胶回收 | 第58-59页 |
| ·DNA的连接反应 | 第59页 |
| ·大肠杆菌的制备 | 第59-60页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第60页 |
| ·免疫共沉淀 | 第60页 |
| ·免疫组化染色 | 第60-61页 |
| ·细胞免疫荧光染色 | 第61-62页 |
| ·免疫组化染色 | 第62-64页 |
| ·细胞免疫焚光染色 | 第64-65页 |
| 第三节 实验结果 | 第65-76页 |
| ·筛选与VEGF启动子结合的转录因子 | 第65-66页 |
| ·Mark1在不同乳腺癌细胞系中的内源表达 | 第66页 |
| ·构建VEGF系列启动子 | 第66-67页 |
| ·过量表达Mark1可以抑制VEGF-LUC的活性 | 第67-69页 |
| ·过量表达Mark1可以抑制VEGF启动子的活性 | 第69-70页 |
| ·Mark1与VEGF启动子结合序列的定位 | 第70-71页 |
| ·Mark1在细胞内定位 | 第71-73页 |
| ·Mark1系列突变体的构建 | 第73页 |
| ·Mark1抑制VEGF区域的定位 | 第73-74页 |
| ·Mark1在乳腺癌组织中的表达 | 第74-76页 |
| 第四节 讨论 | 第76-77页 |
| 第四章 结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 附录 | 第87-100页 |
| 个人简历 | 第100-101页 |
