产蛋白酶霉菌的分离鉴定、蛋白酶基因cDNA克隆及产酶条件优化
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| 1 蛋白酶 | 第10页 |
| 2 微生物蛋白酶 | 第10-12页 |
| ·微生物蛋白酶来源 | 第10-11页 |
| ·微生物蛋白酶的特点 | 第11页 |
| ·真菌蛋白酶特点 | 第11页 |
| ·细菌蛋白酶特点 | 第11页 |
| ·病毒蛋白酶特点 | 第11页 |
| ·微生物蛋白酶分类 | 第11-12页 |
| 3 瘤胃真菌研究进展 | 第12-14页 |
| ·瘤胃真菌特点 | 第12页 |
| ·瘤胃真菌作用 | 第12-13页 |
| ·对蛋白质和淀粉的降解 | 第12-13页 |
| ·对纤维素的降解 | 第13页 |
| ·瘤胃真菌应用前景 | 第13-14页 |
| ·优质真菌蛋白源 | 第13页 |
| ·处理秸秆 | 第13-14页 |
| ·遗传修饰 | 第14页 |
| ·转基因 | 第14页 |
| 4 米曲霉研究进展 | 第14-17页 |
| ·米曲霉特性 | 第14页 |
| ·米曲霉的应用 | 第14-17页 |
| ·用于饲料加工 | 第14-15页 |
| ·用于食品加工 | 第15-17页 |
| ·发酵曲酸 | 第17页 |
| ·用于酿酒 | 第17页 |
| 5 响应面分析法 | 第17-19页 |
| 第二章 产蛋白酶菌的分离、鉴定 | 第19-35页 |
| 1 引言 | 第19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-26页 |
| ·材料 | 第19-21页 |
| ·样品来源 | 第19页 |
| ·培养基 | 第19-20页 |
| ·主要试剂与试剂盒 | 第20页 |
| ·仪器与设备 | 第20-21页 |
| ·方法 | 第21-26页 |
| ·菌株的分离纯化 | 第21页 |
| ·初筛 | 第21页 |
| ·复筛 | 第21页 |
| ·酶活力测定 | 第21-23页 |
| ·菌株鉴定 | 第23页 |
| ·形态鉴定 | 第23页 |
| ·18S rDNA 鉴定 | 第23-26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-33页 |
| ·产蛋白酶菌的分离 | 第26页 |
| ·初筛 | 第26-27页 |
| ·复筛及酶活测定 | 第27-28页 |
| ·形态鉴定 | 第28-29页 |
| ·分子鉴定 | 第29-33页 |
| ·基因组电泳结果 | 第29页 |
| ·18S rDNA PCR 扩增 | 第29-30页 |
| ·PCR 片段胶回收 | 第30页 |
| ·菌液 PCR 验证 | 第30-31页 |
| ·序列分析 | 第31-33页 |
| 4 讨论 | 第33-34页 |
| ·菌株的分离、鉴定 | 第33-34页 |
| ·菌株基因组 DNA 提取 | 第34页 |
| 5 小结 | 第34-35页 |
| 第三章 蛋白酶基因的 cDNA 克隆 | 第35-46页 |
| 1 引言 | 第35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-38页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·样品 | 第35页 |
| ·仪器与设备 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| ·培养基 | 第35页 |
| ·方法 | 第35-38页 |
| ·引物设计 | 第35-36页 |
| ·提取总 RNA | 第36页 |
| ·cDNA 第一链合成 | 第36-37页 |
| ·cDNA 片段扩增 | 第37页 |
| ·PCR 片段回收 | 第37页 |
| ·目的片段的连接与转化 | 第37页 |
| ·菌液 PCR 检验 | 第37页 |
| ·基因序列分析及蛋白质结构预测 | 第37-38页 |
| 3 结果分析 | 第38-44页 |
| ·RNA 的提取 | 第38页 |
| ·cDNA 片段扩增 | 第38-39页 |
| ·PCR 胶回收片段 | 第39页 |
| ·菌液 PCR 鉴定 | 第39页 |
| ·基因序列分析及蛋白质预测 | 第39-44页 |
| ·Npi 基因序列及氨基酸分析 | 第39-42页 |
| ·Alp 基因序列分析及氨基酸预测 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-45页 |
| 5 小结 | 第45-46页 |
| 第四章 产酶条件优化 | 第46-57页 |
| 1 引言 | 第46页 |
| 2 材料与方法 | 第46-47页 |
| ·材料 | 第46-47页 |
| ·主要实验试剂 | 第46页 |
| ·实验仪器 | 第46-47页 |
| ·方法 | 第47页 |
| ·单因素试验 | 第47页 |
| ·响应面法优化设计试验 | 第47页 |
| ·数据分析 | 第47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-55页 |
| ·单因素试验 | 第47-49页 |
| ·接种量对菌株 A18 产蛋白酶活性的影响 | 第47-48页 |
| ·温度对菌株 A18 产蛋白酶活性的影响 | 第48-49页 |
| ·时间对菌株 A18 产蛋白酶活性的影响 | 第49页 |
| ·响应面试验分析 | 第49-55页 |
| ·试验设计结果 | 第49-51页 |
| ·两因素对蛋白酶活性的响应面分析 | 第51-55页 |
| ·验证试验 | 第55页 |
| 4 讨论 | 第55-56页 |
| ·单因素试验 | 第55-56页 |
| ·响应面试验 | 第56页 |
| 5 小结 | 第56-57页 |
| 全文总结 | 第57-58页 |
| 展望 | 第58页 |
| 本文的创新点 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
