| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 目录 | 第13-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-24页 |
| 1 PCV 的生物学特征及 PCVD | 第15-18页 |
| ·PCV 的发现和分类地位 | 第15-16页 |
| ·PCV 的理化特性 | 第16页 |
| ·流行病学 | 第16-18页 |
| 2 PCV 的分子生物学特征 | 第18-20页 |
| ·PCV 的基因结构和遗传特性 | 第18页 |
| ·PCV2 的复制和转录 | 第18页 |
| ·PCV2 的开放阅读框 | 第18-20页 |
| 3 蛋白表达的分离和功能研究的方法 | 第20-23页 |
| ·蛋白表达的检测方法 | 第20-21页 |
| ·蛋白的功能研究方法 | 第21-23页 |
| 4.本研究的目的意义 | 第23-24页 |
| 第二章 PCV2 ORF4的克隆、原核表达和纯化 | 第24-36页 |
| 1 材料 | 第24页 |
| ·病毒毒株 | 第24页 |
| ·载体和菌株 | 第24页 |
| ·酶和主要试剂 | 第24页 |
| ·常用仪器 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-31页 |
| ·引物设计 | 第24-25页 |
| ·病毒基因组的提取 | 第25页 |
| ·PCR 反应体系和反应条件 | 第25-26页 |
| ·质粒的提取 | 第26-27页 |
| ·PCR 产物和质粒的双酶切 | 第27页 |
| ·目的产物和载体的连接 | 第27页 |
| ·感受态的制备 | 第27-28页 |
| ·转化 | 第28页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第28页 |
| ·重组质粒的表达和 SDS-PAGE 电泳鉴定 | 第28-29页 |
| ·免疫印迹鉴定（Western blot） | 第29-30页 |
| ·蛋白的纯化 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-34页 |
| ·目的基因的扩增 | 第31页 |
| ·pGEX-4T-1 空质粒的双酶切 | 第31-32页 |
| ·pGEX-4T-ORF4 重组质粒的 PCR 鉴定 | 第32-33页 |
| ·测序鉴定 | 第33页 |
| ·IPTG 诱导后 SDS-PAGE 电泳图 | 第33页 |
| ·Western blot 检测目的蛋白 | 第33-34页 |
| 4 小结和讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 PCV2 ORF4的克隆、真核表达和纯化 | 第36-47页 |
| 1 材料 | 第36页 |
| ·载体和菌株 | 第36页 |
| ·酶和主要试剂 | 第36页 |
| 2 方法 | 第36-41页 |
| ·引物设计 | 第36-37页 |
| ·重组载体的构建 | 第37页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第37页 |
| ·质粒的大量提取 | 第37-38页 |
| ·质粒的线性化 | 第38页 |
| ·酵母感受态的制备 | 第38页 |
| ·酵母的电转化 | 第38-39页 |
| ·重组酵母的鉴定 | 第39-40页 |
| ·Mut~+及 Mut~s的筛选 | 第40页 |
| ·重组酵母的诱导表达 | 第40页 |
| ·酵母分泌表达上清的浓缩和 SDS-PAGE 检测 | 第40-41页 |
| ·免疫印迹鉴定（Western-blot） | 第41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-45页 |
| ·GST-ORF4 基因的扩增 | 第41-42页 |
| ·特异引物对重组质粒 pPIC9k-GST-ORF4 的 PCR 鉴定 | 第42页 |
| ·AOX引物对重组质粒pPIC9k-GST-ORF4的PCR鉴定 | 第42-43页 |
| ·组质粒的测序鉴定 | 第43页 |
| ·Mut~+和 Mut~s表型的确定 | 第43-44页 |
| ·Mut~+表型的重组酵母菌的诱导表达 | 第44-45页 |
| ·Western blot 检测 | 第45页 |
| 4 小结和讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 GST-ORF4多克隆抗体的制备和免疫荧光检测 | 第47-53页 |
| 1 材料 | 第47页 |
| ·实验动物 | 第47页 |
| ·实验地点 | 第47页 |
| ·常用试剂盒耗材 | 第47页 |
| 2 方法 | 第47-49页 |
| ·抗原的准备 | 第47-48页 |
| ·免疫方法 | 第48页 |
| ·血清采集和处理 | 第48页 |
| ·血清效价的 ELISA 测定 | 第48页 |
| ·细胞的复苏与培养 | 第48页 |
| ·病毒的接种及传代 | 第48-49页 |
| ·免疫荧光检测 PK-15 细胞 | 第49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-51页 |
| ·GST-ORF4 抗体的评价 | 第49-50页 |
| ·Western blot 检测 PCV2 感染后的 PK-15 细胞 | 第50页 |
| ·免疫荧光检测 PCV2 感染后的 PK-15 细胞 | 第50-51页 |
| 4 小结和讨论 | 第51-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 附录一 常用试剂配制及主要仪器 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
