| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语表 | 第8-9页 |
| 1. 前言 | 第9-18页 |
| ·柑橘黄龙病病原 | 第9-11页 |
| ·柑橘黄龙病的诊断方法 | 第11-12页 |
| ·柑橘黄龙病的防治 | 第12页 |
| ·柑橘黄龙病的研究进展 | 第12-13页 |
| ·Ⅰ型分泌系统 | 第13-14页 |
| ·Ⅰ型分泌蛋白和RTX toxins,serralysin | 第14-16页 |
| ·柑橘黄龙病病原中的Ⅰ型分泌系统 | 第16-17页 |
| ·蛋白质表达纯化的研究进展 | 第17页 |
| ·研究目的与意义 | 第17-18页 |
| 2. 材料和方法 | 第18-25页 |
| ·病原叶 | 第18页 |
| ·细菌菌株和质粒 | 第18页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第18-19页 |
| ·主要溶液的配制 | 第19-20页 |
| ·SDS-PAGE | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·CTAB法提取植物DNA | 第21页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第21-22页 |
| ·质粒转化大肠杆菌感受态细胞 | 第22页 |
| ·PCR | 第22页 |
| ·阳性克隆的检测 | 第22-23页 |
| ·重组质粒的表达 | 第23页 |
| ·大肠杆菌细胞的破碎 | 第23页 |
| ·目标蛋白可溶性分析 | 第23-24页 |
| ·硫酸铵沉淀法对蛋白进行粗提 | 第24页 |
| ·应用His标记蛋白质微量纯化套装对目标蛋白进行纯化和分离 | 第24-25页 |
| ·考马斯亮蓝法测蛋白浓度 | 第25页 |
| 3. 结果与分析 | 第25-37页 |
| ·黄龙病病原的检测 | 第25-27页 |
| ·Serralysin_like基因的克隆 | 第27-28页 |
| ·基因片段连接T载体,转化大肠杆菌DH5a感受态细胞 | 第28-29页 |
| ·测序结果 | 第29页 |
| ·连接表达载体所用引物的设计和PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·连接表达载体pET-22b(+) | 第30-31页 |
| ·蛋白的诱导表达和最适表达条件的筛选 | 第31-34页 |
| ·表达蛋白的可溶分析 | 第34-35页 |
| ·蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第36-37页 |
| 4. 讨论 | 第37-42页 |
| ·Serralysin_like基因的克隆 | 第37-39页 |
| ·Serralysin_like蛋白的结构 | 第39-40页 |
| ·包涵体的处理 | 第40-41页 |
| ·蛋白的纯度 | 第41-42页 |
| 5. 总结与展望 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 致谢 | 第48页 |
