| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 目录 | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-18页 |
| 1 miRNA 的生物学特征 | 第12页 |
| 2 miRNA 加工和作用机制 | 第12-13页 |
| ·miRNA 加工过程 | 第12-13页 |
| ·miRNA 的作用机制 | 第13页 |
| 3 miRNA 与人类肿瘤的关系及研究进展 | 第13-14页 |
| ·miRNA 与人类肿瘤的关系 | 第13页 |
| ·miRNA 研究进展 | 第13-14页 |
| 4 乳腺癌中 miRNA 的研究进展 | 第14-15页 |
| 5 本课题研究的背景、目的意义 | 第15-18页 |
| 第二章 miR-155 靶基因预测及筛选 | 第18-27页 |
| 1 软件参数简介 | 第18-19页 |
| ·序列互补性 | 第18页 |
| ·序列守旧性及其它因素 | 第18-19页 |
| ·靶基因软件相关参数 | 第19页 |
| ·TargetScan 相关参数 | 第19页 |
| ·PicTar 相关参数 | 第19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-20页 |
| ·生物信息学软件及数据库 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-20页 |
| ·靶基因预测及筛选 | 第19页 |
| ·靶基因 3’UTR 序列 | 第19-20页 |
| 3 结果 | 第20-25页 |
| 4 讨论 | 第25-27页 |
| 第三章 靶基因 3’UTR 及突变序列克隆和载体构建 | 第27-39页 |
| 1 实验材料与方法 | 第27-28页 |
| ·菌株及细胞 | 第27页 |
| ·载体 | 第27页 |
| ·主要酶和试剂 | 第27-28页 |
| ·PCR 反应引物 | 第28页 |
| ·其他常用试剂及仪器 | 第28页 |
| 2 实验方法 | 第28-32页 |
| ·Bcap37 乳腺癌细胞中总 RNA 的提取 | 第28页 |
| ·甲醛变性琼脂糖凝胶电泳 | 第28-29页 |
| ·ACTA1/CEBPB-3’UTR 序列的 PCR 扩增 | 第29页 |
| ·电泳、割胶回收 | 第29-30页 |
| ·ACTA1/CEBPB-3’UTR 突变序列的 PCR 扩增 | 第30页 |
| ·pRL-TK 和 pGL3-control载体的扩增 | 第30-31页 |
| ·双酶切形成粘性末端 | 第31-32页 |
| ·单酶切验证质粒 | 第31页 |
| ·双酶切形成粘性末端 | 第31-32页 |
| ·酶切产物纯化 | 第32页 |
| ·重组载体构建及验证 | 第32页 |
| ·重组载体的构建 | 第32页 |
| ·双酶切验证和测序验证 | 第32页 |
| 3 结果 | 第32-38页 |
| ·总 RNA OD 值及其完整性验证 | 第32-33页 |
| ·目的片段 PCR 扩增验证 | 第33-34页 |
| ·双荧光素酶载体单酶切验证 | 第34-35页 |
| ·阳性克隆筛选 | 第35-38页 |
| ·双酶切验证 | 第35-36页 |
| ·测序验证 | 第36-38页 |
| 4 讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 miR-155 靶基因的双荧光素酶报告法验证 | 第39-46页 |
| 1 实验材料与试剂 | 第39页 |
| 2 实验方法 | 第39-42页 |
| ·质粒的提取 | 第39-40页 |
| ·细胞转染 | 第40-42页 |
| ·培养基配制 | 第40页 |
| ·转染 | 第40-41页 |
| ·裂解细胞 | 第41-42页 |
| 3 结果 | 第42-44页 |
| ·重组质粒 OD 值 | 第42页 |
| ·荧光信号值及数据处理 | 第42-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-54页 |
| 附录一 试剂配制 | 第54-56页 |
| 附录二 pRL-TK 荧光素酶报告实验载体构建 | 第56页 |
| 附录三 缩略词表 | 第56-57页 |
| 附录四 主要仪器、试剂及其来源 | 第57-58页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
