| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| ·嗜盐四联球菌简介 | 第11页 |
| ·革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌细胞壁 | 第11-12页 |
| ·细菌 RNA 提取方法概述 | 第12-13页 |
| ·嗜盐四联球菌抗逆机制的研究进展 | 第13-16页 |
| ·分子伴侣系统 | 第14-15页 |
| ·相容性溶质 | 第15页 |
| ·hrcA 对 dnaK 操纵子的负调作用 | 第15-16页 |
| ·实时荧光定量 PCR 技术简介 | 第16-20页 |
| ·实时荧光定量 PCR 中的两个重要参数 | 第16-17页 |
| ·定量原理 | 第17页 |
| ·类型和特点 | 第17-18页 |
| ·常用荧光定量 PCR 仪 | 第18-19页 |
| ·荧光定量 PCR 的应用 | 第19-20页 |
| ·本论文研究的目的、主要内容与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 实验材料、仪器和方法 | 第21-31页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·菌种及培养液 | 第21页 |
| ·试剂盒及试剂 | 第21-23页 |
| ·实验仪器及试剂配制 | 第23-24页 |
| ·实验仪器 | 第23-24页 |
| ·试剂配制 | 第24页 |
| ·常用实验方法 | 第24-31页 |
| ·防止 RNA 酶污染的措施 | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌 GT-116 感受态制备 | 第25页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第25-26页 |
| ·核酸浓度测定仪记录 RNA 的纯度和浓度 | 第26页 |
| ·RT-PCR 扩增目的基因片段 | 第26页 |
| ·目的 DNA 片段的回收 | 第26-27页 |
| ·目的基因与克隆载体的连接 | 第27-29页 |
| ·目的基因的转化 | 第29页 |
| ·阳性克隆筛选与测序验证 | 第29-31页 |
| 第三章 不同方法提取细菌总 RNA 与纯化的质量鉴定 | 第31-49页 |
| ·Trizol 法改良前后总 RNA 提取研究 | 第31-34页 |
| ·Trizol 法提取细菌总 RNA | 第31-32页 |
| ·改良后 Trizol 法提取细菌总 RNA | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-34页 |
| ·RNAiso plus 法改良前后总 RNA 提取研究 | 第34-37页 |
| ·RNAiso plus 法提取细菌总 RNA | 第34页 |
| ·改良后 RNAiso plus 法提取细菌总 RNA | 第34页 |
| ·结果与分析 | 第34-37页 |
| ·Qiagen 法改良前后总 RNA 提取研究 | 第37-41页 |
| ·Qiagen 法提取细菌总 RNA | 第37-38页 |
| ·改良后 Qiagen 法提取嗜盐四联球菌总 RNA | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-41页 |
| ·Triton X-100 法的总 RNA 提取研究 | 第41-44页 |
| ·Triton X-100 法提取细菌总 RNA | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-44页 |
| ·RT-PCR 验证 RNA 完整性 | 第44-47页 |
| ·Triton X-100 法提取嗜盐四联球菌总 RNA | 第44页 |
| ·去除 RNA 中的 DNA 污染 | 第44-45页 |
| ·合成 cDNA 的第一条链 | 第45页 |
| ·PCR 扩增嗜盐四联球菌 dnaK 基因 | 第45-46页 |
| ·目的基因的回收、连接、转化 | 第46页 |
| ·阳性克隆的筛选及测序 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-47页 |
| ·本章小结 | 第47-49页 |
| 第四章 RT-qPCR 检测盐胁迫 dnaK 的转录水平 | 第49-58页 |
| ·RT-qPCR 引物特异性鉴定 | 第49-52页 |
| ·引物设计 | 第49页 |
| ·嗜盐四联球菌 RNA 提取 | 第49页 |
| ·反转录反应 | 第49-50页 |
| ·PCR 扩增目的基因及内参基因 | 第50页 |
| ·基因片段的回收、连接、转化 | 第50页 |
| ·阳性克隆筛选及测序 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-52页 |
| ·不同总 RNA 提取方法对 RT-qPCR 的影响 | 第52-56页 |
| ·RNAiso plus 法和 Triton X-100 法提取 T. halophilus 总 RNA | 第52页 |
| ·反转录反应 | 第52页 |
| ·荧光定量 PCR 反应 | 第52-53页 |
| ·结果与分析 | 第53-56页 |
| ·本章小结 | 第56-58页 |
| 讨论与展望 | 第58-60页 |
| 讨论 | 第58-59页 |
| 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 答辩委员会对论文的评定意见 | 第69页 |
