| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 英文缩略词表 | 第13-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-34页 |
| ·单纯疱疹病毒Ⅱ型概述 | 第15-16页 |
| ·单纯疱疹病毒形态与结构 | 第16-17页 |
| ·HSV-2 基因组结构和基因表达 | 第17-19页 |
| ·HSV-2 基因组结构的概述 | 第17-18页 |
| ·单纯疱疹病毒 2 型基因的表达 | 第18-19页 |
| ·生物学性状 | 第19-20页 |
| ·HSV-2 的感染与治疗 | 第20-21页 |
| ·HSV 的 LAT 基因 | 第21-23页 |
| ·LAT 家族 | 第21页 |
| ·LAT 的开放读码框 | 第21-22页 |
| ·LAT 的启动子 | 第22-23页 |
| ·LAT 基因的作用机制 | 第23-31页 |
| ·LAT 下调单纯疱疹病毒裂解基因的表达 | 第23-24页 |
| ·LAT 的抗凋亡作用 | 第24-25页 |
| ·潜伏相关转录体（LAT）抗凋亡作用的具体位置 | 第25-30页 |
| ·潜伏相关转录体 LAT 基因抗凋亡作用的意义和前景 | 第30-31页 |
| ·主要内容及意义 | 第31-34页 |
| ·课题意义 | 第31-34页 |
| 第二章 HSV-2 LAT ORF1 真核表达载体的构建 | 第34-56页 |
| ·前言 | 第34页 |
| ·实验材料 | 第34-38页 |
| ·主要实验仪器和耗材 | 第34-35页 |
| ·细胞、病毒株、菌株和质粒 | 第35-36页 |
| ·主要试剂 | 第36-37页 |
| ·溶液和培养基 | 第37-38页 |
| ·技术路线 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-50页 |
| ·复苏 Vero 细胞 | 第39页 |
| ·传代非洲绿猴肾细胞(vero) | 第39-40页 |
| ·冻存非洲绿猴肾细胞 | 第40页 |
| ·单纯疱疹病毒 2 型的培养 | 第40-41页 |
| ·提取单纯疱疹病毒基因组 DNA | 第41-42页 |
| ·单纯疱疹病毒 2 型 LAT 基因 ORF1 序列的 PCR 扩增 | 第42-43页 |
| ·电泳鉴定 PCR 产物 | 第43-44页 |
| ·凝胶回收纯化 PCR 产物 | 第44-45页 |
| ·pEGFP-C2 真核表达质粒的扩增 | 第45-47页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第45-46页 |
| ·真核表达质粒 pEGFP-C2 的转化 | 第46页 |
| ·pEGFP-C2 质粒的提取 | 第46-47页 |
| ·pEGFP-C2 空载体和单纯疱疹病毒 2 型（HSV-2） LAT ORF1 序列的双酶切 | 第47页 |
| ·双酶切产物的琼脂糖凝胶电泳验证 | 第47-48页 |
| ·回收纯化双酶切的产物 | 第48页 |
| ·单纯疱疹病毒 2 型（HSV-2 ）潜伏相关转录体（LAT）开放读码框 1 （ORF1）序列和大肠杆菌质粒 pEGFP-C2 连接 | 第48页 |
| ·大肠杆菌 Top10 感受态细胞制备 | 第48页 |
| ·连接产物的转化 | 第48页 |
| ·阳性菌落 PCR 的初步鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组的真核表达载体大肠杆菌质粒 pEGFP-ORF1 的提取 | 第49页 |
| ·重组的真核表达载体大肠杆菌质粒 pEGFP-ORF1 双酶切鉴定 | 第49-50页 |
| ·双酶切目的产物的琼脂糖凝胶电泳鉴定 | 第50页 |
| ·重组真核表达载体 pEGFP-ORF1 上 ORF1 序列的测序鉴定 | 第50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-54页 |
| ·Vero 细胞 CPE 病变 | 第50-51页 |
| ·HSV-2333 标准株基因组 DNA 的提取 | 第51页 |
| ·HSV-2 LAT 基因 ORF1 序列的 PCR 扩增 | 第51-52页 |
| ·阳性菌落的 PCR 鉴定 | 第52页 |
| ·重组真核表达载体 pEGFP-C2/LAT ORF1 的酶切和测序鉴定 | 第52-53页 |
| ·重组真核表达载体 pEGFP-ORF1 的测序鉴定 | 第53-54页 |
| ·小结 | 第54-56页 |
| 第三章 单纯疱疹病毒Ⅱ型 LAT 基因开放读码框 1 在 Vero 细胞中的表达及鉴定 | 第56-66页 |
| ·前言 | 第56页 |
| ·实验材料 | 第56-58页 |
| ·主要实验仪器和耗材 | 第56-57页 |
| ·细胞、菌株和质粒 | 第57页 |
| ·主要试剂 | 第57-58页 |
| ·溶液 | 第58页 |
| ·技术路线 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-64页 |
| ·无内毒素质粒的提取 | 第58-60页 |
| ·质粒浓度的测定 | 第60页 |
| ·Vero 细胞的培养 | 第60页 |
| ·重组质粒转染 Vero 细胞 | 第60-61页 |
| ·LAT 基因 ORF1 转录的 RT-PCR 鉴定 | 第61-64页 |
| ·结果与讨论 | 第64-65页 |
| ·Vero 细胞的培养 | 第64页 |
| ·质粒在 Vero 细胞中的表达 | 第64-65页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| 第四章 单纯疱疹病毒Ⅱ型 LAT 基因开放读码框 1 对 Vero 细胞的抗凋亡作用 | 第66-80页 |
| ·前沿 | 第66页 |
| ·实验材料 | 第66-69页 |
| ·主要实验仪器和耗材 | 第66-67页 |
| ·质粒和细胞 | 第67页 |
| ·主要试剂 | 第67-68页 |
| ·溶液 | 第68-69页 |
| ·技术路线 | 第69页 |
| ·实验方法 | 第69-71页 |
| ·Vero 细胞的培养 | 第69页 |
| ·质粒转染 Vero 细胞 | 第69页 |
| ·MTT 法检测细胞增殖 | 第69页 |
| ·放线菌素 D(actinomycin D， ACTD)诱导 Vero 细胞凋亡 | 第69-70页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡 | 第70页 |
| ·Giemsa 染色检测细胞核 | 第70页 |
| ·Hoechst33258 荧光染色观察细胞凋亡 | 第70页 |
| ·Caspase 3 凋亡蛋白检测 | 第70-71页 |
| ·结果与讨论 | 第71-78页 |
| ·质粒 pEGFP-ORF1 在 Vero 细胞中表达的荧光特点 | 第71-72页 |
| ·MTT 法测重组质粒对 Vero 细胞活性的影响 | 第72页 |
| ·放线菌素 D 诱导 Vero 细胞凋亡模型的建立 | 第72-74页 |
| ·放线菌素 D 诱导各组细胞凋亡后荧光显微镜形态学分析 | 第74页 |
| ·Giemsa 染色观察细胞核变化 | 第74-75页 |
| ·Hochest 33258 染色观察细胞凋亡 | 第75页 |
| ·MTT 分析细胞增殖 | 第75-76页 |
| ·流式细胞术分析 | 第76-77页 |
| ·荧光分光光度计检测 Caspase3 活性 | 第77-78页 |
| ·小结 | 第78-80页 |
| 结论与展望 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-88页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 答辩委员会对论文的评定意见 | 第90页 |
