| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-21页 |
| ·启动子概述 | 第10-15页 |
| ·启动子的结构特征 | 第10-11页 |
| ·启动子克隆方法 | 第11-12页 |
| ·启动子的研究方法 | 第12-13页 |
| ·启动子的分类 | 第13页 |
| ·启动子与转录调控 | 第13-15页 |
| ·定向进化技术 | 第15-19页 |
| ·通过PCR在DNA片段中引入随机突变 | 第15页 |
| ·基于DNA同源基因重组 | 第15-18页 |
| ·基于DNA非同源基因重组 | 第18-19页 |
| ·课题研究的目的及意义 | 第19-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-38页 |
| ·材料 | 第21-25页 |
| ·菌株与质粒 | 第21页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR)引物 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21-23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·实验相关溶液 | 第23-25页 |
| ·仪器设备 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-38页 |
| ·菌株筛选与鉴定 | 第25-27页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第27-28页 |
| ·细菌基因组DNA片段的不完全酶切 | 第28页 |
| ·质粒的碱裂解抽提 | 第28页 |
| ·载体的制备 | 第28-29页 |
| ·部分酶切片段与去磷酸化载体的连接反应 | 第29页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第29-30页 |
| ·热激法转化大肠杆菌 | 第30页 |
| ·刚果红染色法筛选目标重组子 | 第30页 |
| ·载体构建 | 第30-31页 |
| ·启动子突变体库的构建 | 第31-34页 |
| ·DNS法测定纤维素酶酶活 | 第34-35页 |
| ·realtime-PCR分析相对表达量 | 第35-38页 |
| ·SDS-PAGE检测表达量蛋白的诱导表达 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-49页 |
| ·枯草芽胞杆菌β-1，4-内切葡聚糖酶基因启动子的克隆 | 第38-41页 |
| ·16S rRNA鉴定枯草芽胞杆菌 | 第38-39页 |
| ·枯草芽胞杆菌基因组DNA片段的提取与部分酶切 | 第39-41页 |
| ·β-1，4-内切葡聚糖酶基因启动子的序列分析 | 第41-44页 |
| ·启动子序列的鉴定 | 第41页 |
| ·启动子的保守序列分析 | 第41页 |
| ·启动子序列的同源性分析 | 第41-42页 |
| ·重组菌株最佳产酶时间的确定 | 第42-43页 |
| ·各个启动子启动报告基因能力的比较 | 第43-44页 |
| ·组合启动子启动报告基因能力的比较 | 第44页 |
| ·449bp启动子片段突变库的构建 | 第44-46页 |
| ·实时荧光定量PCR分析突变启动子启动报告基因能力 | 第46-47页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-53页 |
| ·芽胞杆菌菌株基因组文库的构建及筛选 | 第49-50页 |
| ·芽胞杆菌启动子序列分析及在大肠杆菌中的识别问题 | 第50-51页 |
| ·易错PCR构建突变库及差异表达分析 | 第51-52页 |
| ·利用突变启动子p6表达大肠杆菌丝氨酸羟甲基转移酶 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
