| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 縮略语 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-29页 |
| 1 课题研究背景 | 第13-16页 |
| 2 乳酸菌B-半乳糖苷酶的研究进展 | 第16-29页 |
| ·乳酸菌β-半乳糖苷酶培养条件优化的研究进展 | 第17-20页 |
| ·生物技术开发高产β-半乳糖苷酶的研究进展 | 第20-23页 |
| ·生物信息学在蛋白质结构分析中的应用 | 第23-25页 |
| ·乳酸菌β-半乳糖苷酶分离纯化的研究进展 | 第25-28页 |
| ·本实验的研究目的和内容 | 第28-29页 |
| 第二章 嗜酸乳杆菌产B-半乳糖苷酶发酵条件的优化 | 第29-41页 |
| 1 材料和方法 | 第29-33页 |
| ·实验材料 | 第29-30页 |
| ·试剂与培养基 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| ·实验仪器 | 第30-31页 |
| ·试剂配制 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-33页 |
| ·菌种活化与保存 | 第31页 |
| ·发酵培养 | 第31页 |
| ·菌体细胞分离 | 第31页 |
| ·粗酶液制备 | 第31-32页 |
| ·β-半乳糖苷酶酶活力测定 | 第32-33页 |
| ·Plackett-Burman法 | 第33页 |
| ·Box-Behnken试验设计 | 第33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-39页 |
| ·利用Plackett-Burman法对β-半乳糖苷酶活力影响显著的因素筛选 | 第33-35页 |
| ·发酵条件优化响应面试验分析 | 第35-39页 |
| ·响应面分析 | 第35-39页 |
| ·回归模型的验证 | 第39页 |
| ·结论 | 第39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| ·关于显著因子 | 第39-40页 |
| ·关于优化方法 | 第40-41页 |
| 第三章 基因组改组选育耐酵母粉高产B-半乳糖苷酶菌株 | 第41-56页 |
| 1 材料和方法 | 第41-48页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·实验试剂 | 第41-42页 |
| ·培养基 | 第42-43页 |
| ·发酵培养基 | 第42页 |
| ·再生培养基 | 第42页 |
| ·YE培养基 | 第42-43页 |
| ·初筛、复筛培养基 | 第43页 |
| ·实验仪器 | 第43页 |
| ·实验试剂溶液的配置 | 第43-44页 |
| ·Tris-HCl溶液 | 第43页 |
| ·原生质体缓冲液(LPB)溶液 | 第43页 |
| ·聚乙二醇PEG6000溶液、溶菌酶溶液、变溶菌素储液 | 第43页 |
| ·0.85%生理盐水 | 第43-44页 |
| ·X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖) | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-48页 |
| ·菌株的培养条件 | 第44页 |
| ·嗜酸乳杆菌生长的曲线 | 第44页 |
| ·β-半乳糖苷酶酶活测定方法 | 第44页 |
| ·菌株诱变流程 | 第44-45页 |
| ·嗜酸乳杆菌的紫外诱变 | 第45页 |
| ·嗜酸乳杆菌的超声波诱变 | 第45-46页 |
| ·诱变剂量的选择 | 第46页 |
| ·原生质体制备条件的研究 | 第46-47页 |
| ·基因组改组 | 第47页 |
| ·再生菌落计数 | 第47页 |
| ·筛选方法 | 第47-48页 |
| ·基因组改组菌株遗传稳定性检测 | 第48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-54页 |
| ·菌株生长曲线 | 第48页 |
| ·诱变剂量的选择 | 第48-50页 |
| ·紫外诱变时间的确定 | 第48-49页 |
| ·超声波诱变时间的确定 | 第49-50页 |
| ·菌株诱变筛选结果 | 第50页 |
| ·原生质体制备条件的选择 | 第50-52页 |
| ·原生质体酶解浓度的确定 | 第50-51页 |
| ·原生质体酶解时间的确定 | 第51页 |
| ·原生质体灭活条件的选择 | 第51-52页 |
| ·基因组改组(genome shuffling) | 第52-53页 |
| ·基因组改组菌株的遗传稳定性 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| ·关于诱变技术 | 第54页 |
| ·关于筛选方法 | 第54-55页 |
| ·关于菌株本身 | 第55-56页 |
| 第四章 重组菌B-半乳糖苷酶基因突变分析 | 第56-64页 |
| 1 材料和方法 | 第56-59页 |
| ·实验材料 | 第56页 |
| ·主要试剂 | 第56-57页 |
| ·主要仪器 | 第57页 |
| ·常用试剂配制 | 第57页 |
| ·引物 | 第57-58页 |
| ·方法 | 第58-59页 |
| ·菌株培养条件 | 第58页 |
| ·基因组总DNA抽提 | 第58页 |
| ·Primer Walking设计引物 | 第58页 |
| ·PCR扩增 | 第58-59页 |
| ·改组菌株β-半乳糖苷酶基因序列测定 | 第59页 |
| ·生物信息学分析 | 第59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-62页 |
| ·改组菌β-半乳糖苷酶基因的扩增 | 第59-60页 |
| ·改组菌β-半乳糖苷酶基因序列测定 | 第60页 |
| ·改组菌与标准菌比对分析 | 第60-62页 |
| ·基因序列比对 | 第60页 |
| ·氨基酸序列比对 | 第60页 |
| ·改组菌β-半乳糖苷酶二级结构分析 | 第60-61页 |
| ·改组菌β-半乳糖苷酶Conserved domain分析 | 第61-62页 |
| ·小结 | 第62页 |
| 3 讨论 | 第62-64页 |
| ·关于引物步移Primer Waliking | 第62-63页 |
| ·关于“Tim-barrel”折叠蛋白 | 第63-64页 |
| 第五章 重组菌B-半乳糖苷酶酶学性质分析 | 第64-76页 |
| 1 材料与方法 | 第64-68页 |
| ·实验菌株 | 第64页 |
| ·发酵培养基 | 第64页 |
| ·实验试剂 | 第64页 |
| ·实验仪器 | 第64页 |
| ·实验方法 | 第64-68页 |
| ·菌株培养条件 | 第64-65页 |
| ·粗酶液提取方法 | 第65页 |
| ·酶活测定方法 | 第65页 |
| ·蛋白质标准曲线的绘制和蛋白质浓度测定 | 第65-66页 |
| ·酶的初步分离纯化 | 第66页 |
| ·蛋白质硫酸铵分级盐析 | 第66页 |
| ·透析脱盐 | 第66-67页 |
| ·浓缩 | 第67页 |
| ·温度对酶活力的影响 | 第67页 |
| ·酶的热稳定性 | 第67页 |
| ·酶的低温稳定性 | 第67页 |
| ·pH对酶活力的影响 | 第67页 |
| ·酶的PH耐受性 | 第67-68页 |
| ·金属离子对酶活力的影响 | 第68页 |
| 2 结果与分析 | 第68-74页 |
| ·乳糖酶的分离纯化 | 第68-70页 |
| ·硫酸铵分级盐析 | 第68-70页 |
| ·酶学性质 | 第70-74页 |
| ·温度对酶活力的影响 | 第70页 |
| ·酶对温度的稳定性 | 第70-71页 |
| ·酶的低温保存稳定性 | 第71-72页 |
| ·pH对酶活力的影响 | 第72页 |
| ·β-半乳糖苷酶的pH耐受性 | 第72-73页 |
| ·金属离子对β-半乳糖苷酶酶活性的影响 | 第73-74页 |
| 3 本章小结 | 第74页 |
| 4 讨论 | 第74-76页 |
| ·硫酸铵分级盐析 | 第74-75页 |
| ·透析脱盐 | 第75页 |
| ·温度对β-半乳糖苷酶的影响 | 第75-76页 |
| 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 附录Ⅰ 重组菌基因测序结果 | 第87-89页 |
| 附录Ⅱ B-半乳糖苷酶基因序列比对结果 | 第89-92页 |
| 附录Ⅲ 本研究主要试剂的配制 | 第92-93页 |
| 附录Ⅳ 在读硕士期间发表文章 | 第93页 |
