| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-21页 |
| ·纤维素酶分子生物学研究进展 | 第14-16页 |
| ·纤维素酶系的组成 | 第15页 |
| ·纤维素酶降解纤维素的机制 | 第15页 |
| ·纤维素酶的应用前景 | 第15-16页 |
| ·瑞氏木霉纤维二糖水解酶 | 第16-18页 |
| ·纤维二糖水解酶的结构 | 第16-17页 |
| ·纤维二糖水解酶的理化性质 | 第17页 |
| ·纤维二糖水解酶基因与外源基因的表达 | 第17-18页 |
| ·丝状真菌基因打靶技术 | 第18-20页 |
| ·丝状真菌基因打靶技术的限制因素 | 第18页 |
| ·多基因连续敲除策略 | 第18-19页 |
| ·丝状真菌基因打靶技术发展 | 第19-20页 |
| ·本文研究意义及主要内容 | 第20-21页 |
| 第二章 瑞氏木霉纤维二糖水解酶cbh1和cbh2基因的单敲除 | 第21-45页 |
| ·材料和方法 | 第21-34页 |
| ·质粒和菌株 | 第21页 |
| ·主要实验试剂和仪器 | 第21-22页 |
| ·培养基和培养条件 | 第22页 |
| ·菌种保存 | 第22-23页 |
| ·引物设计及PCR扩增条件 | 第23-25页 |
| ·基因敲除盒的构建 | 第25-27页 |
| ·cbh1基因敲除盒的构建 | 第25-26页 |
| ·cbh2基因敲除盒的构建 | 第26-27页 |
| ·瑞氏木霉的遗传转化 | 第27-28页 |
| ·瑞氏木霉原生质体的合制备 | 第27-28页 |
| ·瑞氏木霉原生质体质量检测 | 第28页 |
| ·瑞氏木霉原生质体转化 | 第28页 |
| ·瑞氏木霉染色体提取 | 第28-29页 |
| ·振荡破壁法快速小量提取 | 第28-29页 |
| ·液氮研磨法大量提取染色体 | 第29页 |
| ·瑞氏木霉转化子的筛选 | 第29-30页 |
| ·瑞氏木霉转化子的PCR验证 | 第30-31页 |
| ·瑞氏木霉转化子△cbh1::pyrG~+的PCR验证 | 第30页 |
| ·瑞氏木霉转化子△cbh2::pyrG~+的PCR验证 | 第30-31页 |
| ·瑞氏木霉转化子的Southern blot验证 | 第31-33页 |
| ·探针的制备 | 第31-32页 |
| ·印迹杂交与显色 | 第32-33页 |
| ·瑞氏木霉转化子的反筛 | 第33页 |
| ·瑞氏木霉转化子△cbh1的PCR验证 | 第33-34页 |
| ·瑞氏木霉转化子△cbh1的Southern blot验证 | 第34页 |
| ·实验结果和讨论 | 第34-43页 |
| ·瑞氏木霉cbh1基因的敲除 | 第34-40页 |
| ·cbh1基因敲除盒的构建 | 第34-35页 |
| ·瑞氏木霉△tku70的转化及△cbh1::pyrG~+转化子的筛选 | 第35页 |
| ·△cbh1::pyrG~+转化子的验证 | 第35-37页 |
| ·△cbh1::pyrG~+转化子的反筛 | 第37页 |
| ·△cbh1菌株的PCR验证 | 第37-38页 |
| ·△cbh1菌株Southern blot验证 | 第38-40页 |
| ·瑞氏木霉cbh2基因的敲除 | 第40-43页 |
| ·本章小结 | 第43-45页 |
| 第三章 瑞氏木霉纤维二糖水解酶cbh1和cbh2基因的双敲除 | 第45-54页 |
| ·材料与方法 | 第45-47页 |
| ·菌株及质粒 | 第45页 |
| ·主要实验试剂 | 第45页 |
| ·主要培养基及培养条件 | 第45-46页 |
| ·本章所用引物 | 第46页 |
| ·Acbh1菌株的转化及转化子的筛选 | 第46页 |
| ·cbh1和cbh2基因双敲除转化子△cbh1△cbh2::pyrG~+的验证 | 第46页 |
| ·瑞氏木霉cbh1和cbh2基因双敲除转化子△cbh1Acbh2::pyrG~+的反筛 | 第46页 |
| ·△cbh1△cbh2::pyrG~+反筛后菌株△cbh1△cbh2的PCR验证 | 第46-47页 |
| ·△cbh1△cbh2::pyrG~+反筛后菌株△cbh1△cbh2的Southern blot验证 | 第47页 |
| ·瑞氏木霉转化子胞外蛋白的SDS-PAGE | 第47页 |
| ·实验结果与讨论 | 第47-52页 |
| ·cbh2基因敲除盒的构建 | 第47页 |
| ·瑞氏木霉△cbh1的转化及△cbh1△cbh2::pyrG~+转化子的筛选 | 第47-48页 |
| ·瑞氏木霉cbh1和cbh2基因双敲除转化子△cbh1△cbh2::pyrG~+的验证 | 第48-49页 |
| ·瑞氏木霉cbh1和cbh2基因双敲除转化子△cbh1△cbh2::pyrG~+的反筛 | 第49页 |
| ·△cbh1△cbh2::pyrG~+反筛后菌株△cbh1△cbh2的PCR验证 | 第49-50页 |
| ·△cbh1△cbh2::pyrG~+反筛后菌株△cbh1△cbh2的Southern blot验证 | 第50-51页 |
| ·瑞氏木霉转化子胞外蛋白的SDS-PAGE分析 | 第51-52页 |
| ·本章小结 | 第52-54页 |
| 全文总结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 攻读学位期间已（待）发表的学术论文目录 | 第60-61页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第61页 |
