| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 略语表 | 第12-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-27页 |
| ·猪链球菌病和链球菌毒力相关因子研究进展 | 第15-18页 |
| ·前言 | 第15页 |
| ·病原学 | 第15-16页 |
| ·病原特性 | 第16页 |
| ·毒力因子 | 第16页 |
| ·流行病学 | 第16-18页 |
| ·潜伏期 | 第16-17页 |
| ·传染源 | 第17页 |
| ·传播途径 | 第17页 |
| ·感染猪的流行病学特性 | 第17页 |
| ·感染人的流行病学特性 | 第17-18页 |
| ·2005年四川猪链球菌病流行特点 | 第18页 |
| ·发病基本情况 | 第18页 |
| ·纤连蛋白及纤连蛋白结合蛋白概述 | 第18-27页 |
| ·细胞外基质(Extracellular matrices,ECM) | 第18-19页 |
| ·纤连蛋白(Fibronectin,Fn) | 第19-21页 |
| ·纤连蛋白概述 | 第19页 |
| ·纤连蛋白分类 | 第19页 |
| ·结构功能 | 第19-21页 |
| ·整联蛋白(integrin) | 第21-23页 |
| ·整联蛋白概述 | 第21页 |
| ·基本特点和功能 | 第21-23页 |
| ·链球菌吸附 | 第23-24页 |
| ·纤连蛋白结合蛋白研究进展 | 第24-27页 |
| 第二章 材料和方法 | 第27-41页 |
| ·研究目的 | 第27页 |
| ·材料与方法 | 第27-41页 |
| ·菌株 | 第27页 |
| ·细胞株 | 第27页 |
| ·质粒 | 第27-29页 |
| ·pMD18-T载体 | 第27-28页 |
| ·pSET4s载体 | 第28-29页 |
| ·主要生化试剂 | 第29页 |
| ·培养基的配制 | 第29-30页 |
| ·质粒抽提相关溶液 | 第30页 |
| ·其他缓冲液及试剂 | 第30页 |
| ·实验动物 | 第30页 |
| ·链球菌的培养 | 第30页 |
| ·PCR | 第30-31页 |
| ·猪链球菌2型fbps基因上下游同源臂的扩增 | 第31页 |
| ·PCR产物或者酶切产物的纯化与回收 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第31-32页 |
| ·连接反应 | 第32页 |
| ·连接产物的转化 | 第32页 |
| ·质粒的制备 | 第32-34页 |
| ·质粒的小量制备 | 第32-33页 |
| ·质粒的大量制备 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第34页 |
| ·链球菌的电转化 | 第34-35页 |
| ·电转化感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·电转化 | 第34-35页 |
| ·基因缺失突变种的筛选 | 第35页 |
| ·基因缺失菌株的抗性筛选 | 第35页 |
| ·突变株遗传稳定分析 | 第35页 |
| ·突变株生长特性研究 | 第35页 |
| ·细胞粘附实验 | 第35-36页 |
| ·细胞侵入试验 | 第36页 |
| ·细胞毒性试验 | 第36-37页 |
| ·pET-28a(+)重组表达质粒的构建 | 第37页 |
| ·pET-28a(+)重组质粒的酶切鉴定 | 第37页 |
| ·蛋白诱导表达 | 第37页 |
| ·蛋白纯化 | 第37页 |
| ·Western Blot | 第37-39页 |
| ·蛋白质SDS-PAGE电泳 | 第37-38页 |
| ·半干电转 | 第38页 |
| ·Westren Blot检测 | 第38-39页 |
| ·突变株对小鼠致病力试验 | 第39页 |
| ·细菌计数 | 第39页 |
| ·攻毒菌液的制备 | 第39页 |
| ·动物实验 | 第39-40页 |
| ·小鼠感染模型 | 第39页 |
| ·感染组织的活菌测定 | 第39-40页 |
| ·病理学检查 | 第40页 |
| ·检查组织、器官 | 第40页 |
| ·组织切片的制备 | 第40页 |
| ·统计处理 | 第40-41页 |
| 第三章 实验结果 | 第41-62页 |
| ·猪链球菌2型fbps基因的克隆与序列分析 | 第41页 |
| ·猪链球菌2型fbps基因缺失突变菌株的构建 | 第41-44页 |
| ·自杀性质粒pSET4s-bps的构建和鉴定 | 第41-43页 |
| ·猪链球菌2型fbps基因缺失菌株的重组鉴定 | 第43-44页 |
| ·猪链球菌2型fbps基因缺失菌株的生物特性研究 | 第44-45页 |
| ·猪链球菌2型fbps基因缺失菌株的遗传稳定性分析 | 第44页 |
| ·猪链球菌2型fbps基因缺失菌株生长特性试验 | 第44-45页 |
| ·Fbps基因突变株对细胞的粘附侵入和毒性研究 | 第45-46页 |
| ·Fbps基因突变株对Hep-2细胞的粘附 | 第45页 |
| ·Fbps基因突变株对Hep-2细胞的侵袭 | 第45-46页 |
| ·Fbps基因突变株对Hep-2细胞的毒性 | 第46页 |
| ·Fbps基因缺失突变菌株对小鼠的毒力试验 | 第46-62页 |
| ·Fbps基因缺失突变对SS2致病力的影响 | 第46-48页 |
| ·Fbps基因缺失突变株和野生型菌株攻毒后动态分布 | 第48-51页 |
| ·病理学检查 | 第51-62页 |
| 第四章 讨论 | 第62-69页 |
| ·猪链球菌和猪链球菌病 | 第62页 |
| ·猪链球菌和宿主的相互作用 | 第62-63页 |
| ·目标基因的选择 | 第63-65页 |
| ·突变株的构建 | 第65页 |
| ·SS2突变株的研究 | 第65-66页 |
| ·FBPS对粘附和侵入的影响 | 第66-67页 |
| ·猪链球菌2型fbps基因突变株生物学特性 | 第67页 |
| ·FBPS对小鼠的致病力的影响 | 第67页 |
| ·小鼠病理学变化 | 第67-69页 |
| 第五章 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-85页 |
| 附录 | 第85-86页 |
| 个人简历 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
