| 缩略语 | 第1-5页 |
| 中文摘要 | 第5-7页 |
| 英文摘要 | 第7-10页 |
| 前言 | 第10-13页 |
| 材料 | 第13-17页 |
| 一 细胞及细菌菌株培养 | 第13页 |
| 二 培养基 | 第13页 |
| 三 常用缓冲液及试剂 | 第13-15页 |
| 四 工具酶 | 第15页 |
| 五 试剂盒 | 第15-16页 |
| 六 主要生化试剂 | 第16页 |
| 七 主要仪器 | 第16-17页 |
| 方法 | 第17-23页 |
| 1 细胞复苏 | 第17页 |
| 2 细胞传代 | 第17页 |
| 3 细胞冻存 | 第17页 |
| 4 细胞计数 | 第17页 |
| 5 细胞基因组 DNA 提取 | 第17页 |
| 6 质粒提取 | 第17页 |
| 7 凝胶 DNA 回收 | 第17页 |
| 8 溶液 DNA 回收 | 第17-18页 |
| 9 PCR 反应 | 第18页 |
| 10 末端加 A | 第18页 |
| 11 连接酶切后的基因和质粒 | 第18页 |
| 12 感受态制备 | 第18-19页 |
| 13 E.coli 转化 | 第19页 |
| 14 质粒及菌种的保存 | 第19页 |
| 15 细胞转染 | 第19页 |
| 16 病毒的制备和浓缩 | 第19-20页 |
| 17 病毒滴度测定 | 第20页 |
| 18 tPA 和 Pro-uk 活性测定 | 第20-21页 |
| 19 利用流式细胞仪分析细胞中 EGFP 表达强度 | 第21页 |
| 20 ELISA | 第21页 |
| 21 SDS PAGE | 第21页 |
| 22 Western Blot | 第21-22页 |
| 23 使用 STREAMLINE SP 阳离子柱纯化 rhPC | 第22-23页 |
| 结果 | 第23-52页 |
| 一 基于逆转录病毒载体的表达系统的建立和评价 | 第23-32页 |
| 1 重组逆转录病毒载体 PQCXIN/EGFP 的构建 | 第23-24页 |
| 2 含 EGFP 的重组病毒的制备 | 第24页 |
| 3 逆转录病毒载体系统表达 EGFP 的效果 | 第24-29页 |
| 4 逆转录病毒载体系统表达 rhPC 的评价 | 第29-32页 |
| 二 高表达 rhPC 的细胞系的筛选和 rhPC 的纯化鉴定 | 第32-37页 |
| 1 重组病毒载体 PQCXIN/rhPC/EGFP 的构建 | 第32-33页 |
| 2 rhPC 高表达细胞系的筛选 | 第33-34页 |
| 3 rhPC 的纯化鉴定 | 第34-37页 |
| 三 表达调控元件对逆转录病毒载体的优化 | 第37-52页 |
| 1 表达调控元件的克隆 | 第37-38页 |
| 2 表达调控元件在质粒载体中的验证 | 第38-50页 |
| 3 含 RESE 的病毒载体的构建 | 第50-52页 |
| 讨论 | 第52-57页 |
| 一 逆转录病毒系统 | 第52-53页 |
| 二 表达调控元件 | 第53-55页 |
| 三 HEK293 细胞系 | 第55-57页 |
| 总结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-60页 |
| 综述 | 第60-69页 |
| 个人简历 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
