| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 一、前言 | 第11-23页 |
| 1 CTL与细胞免疫应答 | 第11-12页 |
| 2 四聚体技术 | 第12-13页 |
| 3 HLA-A~*2402 | 第13页 |
| 4 外源基因在E.coli中的表达 | 第13-14页 |
| 5 HCMV | 第14-15页 |
| 6 CD8~+T细胞的免疫记忆 | 第15-19页 |
| 7 CD27与CD28的表达 | 第19页 |
| 8 PD-1和PD-L1/PD-L2 | 第19-20页 |
| 9 穿孔素 | 第20-21页 |
| 10 本课题的研究目的和意义 | 第21页 |
| 11 本课题的技术路线 | 第21-23页 |
| 二、实验材料与设备 | 第23-26页 |
| 1 主要仪器和设备 | 第23页 |
| 2 血样来源 | 第23页 |
| 3 主要试剂和材料 | 第23-25页 |
| 4 本实验中所用主要试剂配制方法见附录Ⅰ | 第25-26页 |
| 三、实验方法与步骤 | 第26-35页 |
| 1 HLA-A2表型鉴定 | 第26页 |
| 2 人白细胞总RNA抽提及cDNA合成 | 第26-27页 |
| 3 HLA-A~*2402重链cDNA的克隆扩增 | 第27-28页 |
| 4 融合BSP的HLA-A~*2402重链胞外域(HLA-A~*2402-BSP)表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 5 HLA-A~*2402-BSP及mHLA-A~*2402-BSP的表达和鉴定 | 第29-30页 |
| 6 包涵体的纯化 | 第30页 |
| 7 HLA-A~*2402-QYD单体的制备及其生物素化 | 第30-31页 |
| 8 HLA-A~*2402-QYD四聚体的制备和鉴定 | 第31页 |
| 9 四聚体结合活性的流式细胞术分析 | 第31-32页 |
| 10 HLA-A2表型鉴定 | 第32-33页 |
| 11 供者血清HCMV IgG鉴定 | 第33页 |
| 12 全血中不同浓度的HLA-A~*2402-QYD四聚体染色 | 第33页 |
| 13 HCMV特异性CD8~+T细胞的定量分析 | 第33页 |
| 14 HCMV特异性CD8~+T细胞一些表面分子的表达分析 | 第33-34页 |
| 15 特异性CD8~+T细胞内穿孔素染色 | 第34页 |
| 16 表面分子和穿孔素表达的流式细胞仪分析 | 第34页 |
| 17 统计学分析 | 第34-35页 |
| 四、实验结果 | 第35-54页 |
| 1 HLA-A~*2402重链基因cDNA的克隆及其序列测定 | 第35页 |
| 2 HLA-A~*2402-BSP及mHLA-A~*2402-BSP原核表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 3 小鼠抗HLA-A~*0201抗血清制备 | 第36-37页 |
| 4 HLA-A~*2402-BSP及mHLA-A~*2402-BSP在E.coli中的表达及鉴定 | 第37-38页 |
| 5 HLA-A~*2402-QYD单体的制备及其生物素化 | 第38页 |
| 6 HLA-A~*2402-QYD四聚体的制备 | 第38-39页 |
| 7 HLA-A~*2402-QYD四聚体的结合活性 | 第39页 |
| 8 供者的筛选 | 第39-40页 |
| 9 HLA-A~*2402-QYD四聚体最佳用量的滴定 | 第40-41页 |
| 10 HCMV特异性CD8~+T细胞的定量 | 第41页 |
| 11 HCMV特异性CD8~+T细胞表面分子CD62L、CCR7和CD127的表达 | 第41-42页 |
| 12 HCMV特异性CD8~+T细胞表面分子CD28、CD27的表达 | 第42页 |
| 13 HCMV特异性CD8~+T细胞表面分子PD-1的表达 | 第42页 |
| 14 HCMV特异性CD8~+T细胞穿孔素的表达 | 第42-54页 |
| 五、讨论 | 第54-61页 |
| 六、结论 | 第61-62页 |
| REFERENCES(参考文献) | 第62-69页 |
| 附录Ⅰ 本实验中所用主要试剂配制方法 | 第69-71页 |
| 附录Ⅱ 英文缩略词 | 第71-72页 |
| 附录Ⅲ 在校期间发表研究论文情况 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
