牛精子全蛋白制备方法的建立及鲜、冻精差异蛋白的检测
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 前言 | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-18页 |
| ·精液冷冻的影响因素 | 第9-10页 |
| ·冷冻稀释液 | 第9页 |
| ·冷冻方法的影响 | 第9-10页 |
| ·冷冻解冻后精子所发生的物理化学变化 | 第10-12页 |
| ·精子形态结构的变化 | 第10页 |
| ·精子中蛋白质的变化 | 第10-12页 |
| ·二维电泳蛋白制备方法的研究进展 | 第12-15页 |
| ·变性剂 | 第13页 |
| ·去污剂 | 第13-14页 |
| ·还原剂 | 第14页 |
| ·载体两性电解质 | 第14-15页 |
| ·精子二维电泳技术的研究进展 | 第15-17页 |
| ·二维电泳技术的研究进展 | 第15页 |
| ·二维电泳技术在研究精子方面的应用 | 第15-16页 |
| ·精子蛋白制备方法的研究进展 | 第16-17页 |
| ·本研究目的和意义 | 第17-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-26页 |
| ·试验材料 | 第18-20页 |
| ·样本的采集 | 第18页 |
| ·主要仪器 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18-19页 |
| ·试剂配制 | 第19-20页 |
| ·试验方法 | 第20-26页 |
| ·精子细胞的洗涤 | 第20页 |
| ·精子细胞不同裂解方法的比较 | 第20-21页 |
| ·蛋白定量 | 第21-22页 |
| ·一向等电聚焦 | 第22-23页 |
| ·IPG胶条的平衡和转移 | 第23-24页 |
| ·二向SDS-PAGE | 第24页 |
| ·染色 | 第24页 |
| ·凝胶图像分析 | 第24-26页 |
| 第三章 结果 | 第26-33页 |
| ·三种裂解方法的比较 | 第26-31页 |
| ·三种裂解方法提取蛋白浓度的比较 | 第26页 |
| ·尿素裂解法与尿素盐酸胍两步裂解法的比较 | 第26-27页 |
| ·不同染色方法的比较 | 第27-28页 |
| ·尿素盐酸胍两步裂解法重复性的比较 | 第28-29页 |
| ·尿素盐酸胍两步裂解法与Trizol法的比较 | 第29-30页 |
| ·牛精子蛋白二维电泳全蛋白图谱的建立 | 第30-31页 |
| ·鲜精和冻精蛋白质图谱的表达变化 | 第31-33页 |
| 第四章 讨论 | 第33-40页 |
| ·选择合适的蛋白制备方法 | 第33-35页 |
| ·第一向等电聚焦条件的优化 | 第35页 |
| ·平衡条件的优化 | 第35-36页 |
| ·转移及二向SDS-PAGE | 第36页 |
| ·染色 | 第36页 |
| ·凝胶图像分析 | 第36-37页 |
| ·双向电泳操作注意事项 | 第37-38页 |
| ·鲜精和冻精差异蛋白的软件分析 | 第38-40页 |
| 第五章 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-48页 |
| 附录 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 作者简介 | 第50页 |
| 攻读学位期间发表文章 | 第50页 |
