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驯鹿β-防御素-1(reBD-1)基因的原核表达及蛋白活性的鉴定

摘要第1-4页
Abstract第4-10页
1 引言第10-16页
   ·抗菌肽简介第10页
   ·抗菌肽作用第10页
   ·防御素简介第10-11页
   ·防御素的种类第11页
   ·防御素分子结构及表达部位第11-12页
     ·α-防御素第11页
     ·β-防御素第11页
     ·θ-防御素第11页
     ·植物防御素第11-12页
     ·昆虫防御素第12页
   ·防御素的作用及其机理第12-14页
     ·哺乳动物防御素的作用第12-13页
     ·植物防御素的作用第13-14页
     ·昆虫防御素的作用第14页
   ·防御素的应用第14-16页
     ·防御素与基因工程第14-15页
     ·防御素与临床应用第15页
     ·防御素的其他应用第15-16页
2 pET-32a(+)/reBD-1 原核表达载体的构建第16-31页
   ·实验材料第16-17页
     ·菌珠第16页
     ·载体及酶第16页
     ·主要试剂第16页
     ·主要实验仪器第16-17页
   ·实验方法第17-25页
     ·引物第17页
     ·驯鹿总RNA 的提取第17-19页
     ·驯鹿总RNA 的检测第19页
     ·RT-PCR 反转录扩增reBD-1 基因第19-20页
     ·目的片段的回收第20-21页
     ·克隆载体的构建第21-23页
     ·编码reBD-1 成熟肽基因的扩增第23页
     ·原核表达体系的构建第23-25页
   ·结果第25-30页
     ·总RNA 的检测结果第25-26页
     ·RT-PCR 扩增结果第26-27页
     ·reBD-1 重组质粒的筛选和鉴定第27-28页
     ·reBD-1 重组质粒序列分析第28-29页
     ·reBD-1 成熟肽基因的克隆第29页
     ·pET-32a(+)- reBD-1 重组质粒的鉴定结果第29-30页
   ·讨论第30-31页
     ·载体及菌株的选择第30-31页
     ·关于reBD-1 成熟肽的特性第31页
   ·小结第31页
3 pET-32a(+)/reBD-1 融合蛋白的表达及纯化第31-44页
   ·材料第31-32页
     ·菌株与质粒第31页
     ·主要试剂第31-32页
     ·主要实验仪器第32页
   ·实验方法第32-40页
     ·重组蛋白pET-32a(+)/reBD-1 的诱导表达第32-33页
     ·主要试剂的配制第33页
     ·目的蛋白原核表达及诱导表达条件的优化第33-34页
     ·SDS-PAGE 电泳第34-36页
     ·大量表达靶蛋白第36-37页
     ·目的蛋白的纯化与复性第37-40页
   ·结果第40-43页
     ·目的蛋白表达条件的优化第40-41页
     ·重组蛋白表达形式的分析第41-42页
     ·目的蛋白的纯化第42-43页
   ·讨论第43页
   ·小结第43-44页
4 pET-32a(+)/reBD-1 重组蛋白生物活性的研究第44-46页
   ·材料第44页
   ·方法第44页
   ·结果第44-45页
   ·讨论第45页
   ·小结第45-46页
5 结论第46-47页
致谢第47-48页
参考文献第48-54页
作者简介第54页

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