| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 1 引言 | 第10-20页 |
| ·布鲁菌病原生物学特性及培养特性 | 第10-12页 |
| ·布鲁氏菌的致病机理及病理变化 | 第12页 |
| ·布鲁氏菌主要表面抗原及相关蛋白 | 第12-16页 |
| ·Omp2a 和Omp2b | 第14页 |
| ·Omp25 和Omp31 | 第14-15页 |
| ·bp26 蛋白 | 第15页 |
| ·脂蛋白 | 第15-16页 |
| ·防治 | 第16页 |
| ·布鲁氏菌检测方法的研究进展 | 第16-19页 |
| ·细菌学方法 | 第17页 |
| ·血清学诊断 | 第17页 |
| ·ELISA 方法 | 第17-18页 |
| ·聚合酶链反应法（PCR） | 第18页 |
| ·核酸探针检测 | 第18-19页 |
| ·免疫胶体金技术 | 第19页 |
| ·本课题研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| 2 实验部分 | 第20-49页 |
| ·实验一 牛布鲁氏菌外膜蛋白 Omp25 基因克隆、原核表达及鉴定 | 第20-37页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·菌种和质粒载体 | 第20页 |
| ·主要试剂、工具酶及试剂盒 | 第20页 |
| ·主要实验仪器与设备 | 第20-21页 |
| ·主要溶液配方 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-22页 |
| ·目的基因的扩增与回收 | 第21页 |
| ·引物的设计及目的片段扩增 | 第21-22页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第22页 |
| ·目的基因的克隆和阳性重组质粒的筛选 | 第22-25页 |
| ·PCR 产物与pMD19-T simple vector 载体的连接 | 第22-23页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第23页 |
| ·连接产物的转化 | 第23页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第23-24页 |
| ·阳性菌的保存及测序 | 第24-25页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第25-27页 |
| ·目的片段与pGEX-6P-1 载体的酶切回收 | 第25页 |
| ·目的片段与载体的连接 | 第25-26页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第26页 |
| ·重组质粒的转化 | 第26页 |
| ·转化菌质粒的提取 | 第26-27页 |
| ·重组表达载体的PCR 鉴定及酶切鉴定 | 第27页 |
| ·用经鉴定为阳性的菌液测序确证 | 第27页 |
| ·阳性菌的保存 | 第27页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第27页 |
| ·表达产物的检测 | 第27-29页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第27-28页 |
| ·Western-blot 分析 | 第28-29页 |
| ·最佳诱导条件的确定 | 第29页 |
| ·重组蛋白表达的最佳诱导浓度的确定 | 第29页 |
| ·重组蛋白表达的最佳诱导时间的确定 | 第29页 |
| ·结果 | 第29-35页 |
| ·PCR 扩增结果 | 第29-30页 |
| ·重组质粒pMD-Omp25 的PCR 和酶切鉴定 | 第30-31页 |
| ·0mp25 基因克隆后的测序结果 | 第31-34页 |
| ·重组表达载体的构建和鉴定 | 第34-35页 |
| ·表达产物的检测 | 第35页 |
| ·SDS-PAGE 检测 | 第35页 |
| ·Western-blot 分析 | 第35页 |
| ·讨论与结论 | 第35-37页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 2 1.10.2 结论 | 第37页 |
| ·实验二 重组蛋白pGEX-Omp25 的纯化和免疫学特性研究 | 第37-49页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·主要试剂及实验动物 | 第37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37页 |
| ·纯化蛋白溶液的配置 | 第37-38页 |
| ·ELISA 检测所用溶液 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-41页 |
| ·重组蛋白的大量表达与纯化 | 第38页 |
| ·实验动物的免疫 | 第38-39页 |
| ·布鲁氏菌病 ELISA 诊断方法的初步探 | 第39-41页 |
| ·结果 | 第41-48页 |
| ·重组蛋白切胶纯化结果 | 第41页 |
| ·抗原最佳包被方法的确定 | 第41-42页 |
| ·最适抗原与最佳血清稀释度的确定 | 第42-43页 |
| ·间接 ELISA 各工作条件摸索的结果 | 第43-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49页 |
| 3 总体讨论与分析 | 第49-52页 |
| ·抗原蛋白的选取 | 第49-50页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第50页 |
| ·ELISA 方法的初步摸索 | 第50-52页 |
| 4 本研究的创新与不足 | 第52-53页 |
| ·本研究的创新 | 第52页 |
| ·本研究的不足 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 作者简介 | 第60页 |
