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RT-PCR技术检测贝类中诺瓦克样病毒的研究

1.引言第1-19页
   ·立题背景和意义第9页
   ·诺瓦克样病毒简介第9-12页
     ·病毒的分类第9-10页
     ·形态学特征和理化特性第10页
     ·基因组结构和分类第10-11页
     ·病毒的遗传变异第11-12页
     ·病毒的繁殖第12页
   ·病毒的致病性和流行病学第12-14页
     ·致病机制第12页
     ·临床症状第12页
     ·流行情况第12-13页
     ·传播途径第13页
     ·病毒通过贝类的传播第13-14页
   ·诺瓦克病毒性腹泻的预防与控制第14页
   ·NLVS检测方法研究现状第14-18页
     ·电镜法第14-15页
     ·免疫法第15-16页
     ·Reverse transcript-polymerase chains reaction,RT-PCR法:第16-17页
     ·荧光定量PCR第17-18页
     ·序列特异性核酸体外扩增技术(Nucleic acid specific-based amplification,NASBA)第18页
   ·论文的研究目的和研究方法第18-19页
2.材料与方法第19-28页
   ·毒株和细胞系第19页
   ·配制试剂第19-20页
     ·MEM基础培养基(含谷胺酰胺)第19页
     ·双抗第19页
     ·组织细胞生长液第19页
     ·消化液第19-20页
     ·变性裂解液第20页
     ·甘氨酸缓冲液第20页
     ·磷酸缓冲液第20页
   ·仪器与设备第20-21页
   ·样品与其它试剂第21页
   ·研究方法第21-28页
     ·RT-PCR检测方法建立第21-22页
     ·RT-PCR检测贝类中人工污染的诺瓦克样病毒第22-23页
     ·诺瓦克样病毒回收率的测定第23-24页
     ·贝类中诺瓦克样病毒回收富集方法优化第24-25页
     ·贝类中诺瓦克样病毒RNA提取方法比较第25-26页
     ·RT-PCR实际检测贝类中的诺瓦克样病毒第26-28页
3.结果与分析第28-40页
   ·RT-PCR反应条件优化结果第28-30页
     ·最适Mg~(2+)浓度优化第28-29页
     ·最适退火温度优化第29页
     ·最适引物量优化第29-30页
     ·最适反应循环数优化第30页
   ·RT-PCR方法的灵敏度第30-32页
     ·病毒液滴度测定第30-32页
     ·RT-PCR方法的灵敏度测定第32页
   ·RT-PCR产物测序第32-33页
   ·RT-PCR检测贝类中人工污染诺瓦克样病毒的结果第33页
   ·贝类人工污染的诺瓦克样病毒回收率测定第33-35页
     ·样品中病毒原液量的测定第34-35页
     ·人工污染后病毒量的测定第35页
   ·贝类中诺瓦克样病毒回收富集方法优化第35-36页
   ·贝类中诺瓦克样病毒RNA提取方法比较第36-37页
   ·RT-PCR方法实际检测贝类中的诺瓦克样病毒第37-40页
4.讨论第40-44页
   ·RT-PCR检测诺瓦克样病毒第40页
   ·RT-PCR方法的建立第40-41页
     ·引物的选择第40-41页
     ·RT-PCR条件优化第41页
   ·病毒的浓缩富集第41-42页
   ·RNA提取方法第42页
   ·诺瓦克样病毒污染的监测第42-44页
5.结论第44-45页
参考文献第45-52页
附录第52-53页
在读期间发表的学术论文第53-54页
作者简历第54-55页
致谢第55页

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